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清风寨

银虫 (小有名气)

[求助] 将两个基因串联到启动子下面,两个基因都能表达么?

想请问各位大侠,如果我将两个基因GFP、neo基因串联到A3启动子下游,两个基因都是完整的阅读框,中间用内切酶Not I酶切连接。下游再加上加尾信号和反向重复序列。这样子GFP和neo两个基因都能表达么?
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冷风过心变热
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pennchem

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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清风寨: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-20 10:38:04
可以的,就是第一个基因以TAA结尾,然后第二个基因紧接着ATG开始,这样,两个基因就在同一启动子下表达。在很多生物基因组内都是这样的模式。只是分子生物学用酶切的方法很难凑效,上overlapping PCR吧。
行至水穷处,坐看云起时
16楼2012-12-20 10:30:12
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

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就是 『基因一』TA『ATG基因二』,这方面文献应该不少,也可以用Duet之类已经构建好的同时表达的质粒。
行至水穷处,坐看云起时
17楼2012-12-20 10:33:51
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果回忆一下生物化学里面的内容,核糖体遇到TAA就水解了,这样核糖体就滑落下来,如果后面正好是ATG,那么就可以继续延伸了,所以中间不能(或者尽可能)不出现其它的碱基,否则核糖体就解体了。

植物里面有很多基因是如此构建表达的。
行至水穷处,坐看云起时
19楼2012-12-20 11:36:06
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

是DNA上转录mRNA,上面有核糖体,形成葫芦串吧。如果随机的核糖体结合mRNA,那密码子岂不是很容易移位了?

基因一有TAA结尾,上的去一个H2O,这样前面的蛋白就释放出来了,后面ATG启动,是新的蛋白,两者不会连在一起的。
行至水穷处,坐看云起时
21楼2012-12-20 12:12:45
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

EMBO J. 1990 Aug;9(8):2639-47.
Eukaryotic coupled translation of tandem cistrons: identification of the influenza B virus BM2 polypeptide.
Horvath CM, Williams MA, Lamb RA.
Source

Department of Biochemistry, Molecular Biology and Cell Biology, Northwestern University, Evanston, IL 60208-3500.
行至水穷处,坐看云起时
27楼2012-12-20 13:21:23
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
51楼: Originally posted by xissy at 2014-10-09 16:13:33
请教一下,会不会第一个基因TAA结尾后,就不能启动第二基因了呢???...

生物里面很多基因就是这么表达的,从噬菌体到植物。
行至水穷处,坐看云起时
52楼2014-10-10 10:14:10
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