24小时热门版块排行榜    

查看: 3316  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

[求助] 最近做WB实验,膜总是很花

最近在做WB实验,可是最后显影发现整张膜总是花花的,好像蛋白跑得到处都是,但是目的条带也出现了。是不是洗膜不够彻底,可是之前做都是很好的实验结果,最近一直重复不出来,很郁闷……

1214-2.jpg
回复此楼
尽自己最大的努力,优秀毕业!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2012-12-17 07:21:12
乖乖宝贝: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢,我今天再做已经换新的封闭液啦。明天看看结果,我看着Marker转上膜非常清楚啦!内参我是250mA,1小时。以前做的实验结果不错的。 2012-12-17 18:39:01
你膜没封闭好,一般来说要室温摇动1-2小时。其实建议4度封闭过夜。

封闭完之后可以洗的,用TBST洗3次,是可以的。如果封闭得好,是不会无端端把封上去的蛋白洗掉的。

我觉得还有个问题是不是你转膜没转好?
9楼2012-12-16 23:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
乖乖宝贝: 金币+5, 谢谢回复 2012-12-16 10:36:37
这个一抗以前做过吗?感觉像是二抗过量了。
2楼2012-12-16 01:04:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-16 01:04:38
这个一抗以前做过吗?感觉像是二抗过量了。

做过的,条件一摸一样,是内参!之前条件都摸清楚了。但是最近做WB,不管什么条件最终显影膜都是这样花花的。随便说一下,我用碧云天的封闭液封闭后,我还是用TBST洗3次,才孵育的。是不是不该洗?
尽自己最大的努力,优秀毕业!
3楼2012-12-16 10:38:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2012-12-16 10:38:52
做过的,条件一摸一样,是内参!之前条件都摸清楚了。但是最近做WB,不管什么条件最终显影膜都是这样花花的。随便说一下,我用碧云天的封闭液封闭后,我还是用TBST洗3次,才孵育的。是不是不该洗?...

如果一抗以前做过的,可能是二抗的问题,你可以借别的实验室的二抗试试。封闭后一般洗两次就够了,有人这一步不洗。关键洗膜是在一抗孵育后和二抗孵育后,如果洗不干净可能会造成高背景。
4楼2012-12-16 11:26:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见