应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 最近做WB实验，膜总是很花
51/1返回列表
查看: 3327  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

[求助] 最近做WB实验，膜总是很花

最近在做WB实验，可是最后显影发现整张膜总是花花的，好像蛋白跑得到处都是，但是目的条带也出现了。是不是洗膜不够彻底，可是之前做都是很好的实验结果，最近一直重复不出来，很郁闷……

1214-2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
尽自己最大的努力，优秀毕业！
1楼 2012-12-16 00:30:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yj279685695

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2012-12-16 15:38:11
我用的是碧云天的封闭液，以前一直都用这个封闭液，也没有出现过这样的情况。有没有大侠也遇到过一样的花膜情况，后来是怎么改进的……...

要不要用脱脂奶粉试一下？封闭少洗或者不洗，孵抗体的时候常规洗涤
赞一下 回复此楼
东临碣石，以观沧海
8楼2012-12-16 15:51:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
乖乖宝贝: 金币+5, 谢谢回复 2012-12-16 10:36:37
这个一抗以前做过吗？感觉像是二抗过量了。
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-16 01:04:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乖乖宝贝

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-16 01:04:38
这个一抗以前做过吗？感觉像是二抗过量了。

做过的，条件一摸一样，是内参！之前条件都摸清楚了。但是最近做WB，不管什么条件最终显影膜都是这样花花的。随便说一下，我用碧云天的封闭液封闭后，我还是用TBST洗3次，才孵育的。是不是不该洗？
赞一下 回复此楼
尽自己最大的努力，优秀毕业！
3楼2012-12-16 10:38:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2012-12-16 10:38:52
做过的，条件一摸一样，是内参！之前条件都摸清楚了。但是最近做WB，不管什么条件最终显影膜都是这样花花的。随便说一下，我用碧云天的封闭液封闭后，我还是用TBST洗3次，才孵育的。是不是不该洗？...

如果一抗以前做过的，可能是二抗的问题，你可以借别的实验室的二抗试试。封闭后一般洗两次就够了，有人这一步不洗。关键洗膜是在一抗孵育后和二抗孵育后，如果洗不干净可能会造成高背景。
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-16 11:26:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭