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伤何处

木虫 (正式写手)

[求助] 克隆基因,挑克隆拿去测序,好多点突怎么办!?

两个基因都挑了11个送去测序,之前PCR扩增是22个循环扩的,然后连接载体转化。。测序结果显示,每条都有很多点突怎么办?用的是ExTaq酶

[ Last edited by 伤何处 on 2012-12-13 at 21:15 ]
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对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
伤何处: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢,那我用pfu的扩增试一下? 2012-12-14 09:42:53
SNP的概率是1/1000,如果一个PCR产物里很多点突变,应该不仅仅是SNP的原因。

Taq酶系列扩增<500bp
pfu扩增500-3000bp
taq+pfu扩增更长的,或者有一款LA系列的酶吧

上面是我自己做实验的经验。
行至水穷处,坐看云起时
7楼2012-12-14 09:30:15
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