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Cllair

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒pcr

我提取到了质粒50ul,但是一做单酶切和双酶切实验鉴定的话就会用去很多,可能最后用来用载体连接的时候就没剩余多少了,而且我还想把质粒拿去测序一下。所以我想问一下,能不能直接对质粒进行pcr实验,如果可以的话,我就能大量获得质粒,不用来回的涂平板摇菌,再回收和再酶切鉴定了。请问诸位有尝试过这种实验的么,麻烦给点指导吧。不胜感激。。。
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有今生没来世,且行且珍惜。
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Cllair

金虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-15 07:18:24
平板可以保存三个月没问题,不过两个月后再挑克隆摇菌就不是很理想了。时间长了最好是划线后再挑菌。话说回来,你鉴定正确之后不是应该把该克隆再次划线,并且做甘油stock冻存的吗?...

我已经送测序了,的鉴定结果还没有出来,谢谢你的提醒,结果出来我会立刻把该克隆再次划线,并且做甘油stock冻存。。。
有今生没来世,且行且珍惜。
22楼2012-12-15 18:16:28
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shsDerek

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
转化Top10,再提质粒就可以获得大量质粒
2楼2012-12-13 12:39:40
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你质粒的大小,而且这样获得的质粒有发生点突变的危险,而胞内由于修复系统,几乎不会有突变。酶切后质粒丢失,可能是你回收的方法或试剂盒不好,建议考虑换个试剂盒。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-12-13 12:47:06
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也是刚刚知道可以直接用质粒pcr,而且这个只是一个大概的范围,老板建议直接测序

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
4楼2012-12-13 13:19:52
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