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lvanmorison

禁虫 (初入文坛)
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分子生化实验经验积累

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1楼2012-12-12 23:39:47
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by lvanmorison at 2012-12-14 18:28:15
用PBS洗后，吸干净PBS，不加入裂解液，直接刮下来？
还是不吸干PBS，利用剩余的PBS来刮细胞？
谢谢！...

我一般是 再加入一部分新的PBS 之后直接刮下来

你PBS洗的话，就直接倒掉就可以了，不用吸得很干净。因为你之后还要再离心，那里会还有一次机会给你吸尽残留的PBS。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-12-14 23:48:56
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diandong

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2012-12-13 17:49:05
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助和交流！ 2012-12-13 21:02:19
必须要先加loading buffer 然后再煮的吧。。。不能直接煮的吧~~~

我一般是先弃去培养基以及死掉的细胞，然后用预冷的PBS洗两遍。再用细胞刮铲刮细胞，收集到EP管中，然后再离心。之后加100 uL裂解液，冰上裂解30分钟，其间隔十分钟就用涡旋剧烈震荡30秒。最后12000转离心 收集上清。

加完loading buffer之后混匀然后再煮5分钟，上样。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-12-13 20:41:56
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tinycuke

新虫 (初入文坛)
想问一下，加loading煮5min上样，剩下的下次还可以再用么？如果可以又能放多久呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2012-12-14 00:31:00
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