24小时热门版块排行榜    

查看: 2668  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

一面之缘1988

新虫 (小有名气)

[求助] 目的基因表达载体的构建问题~请指教

本人新人一名,知识匮乏,想请教大家一点关于表达载体的问题~~
当目的基因序列测出来后,老师让我做个表达,看看目的基因的表达产物怎样,好像是先要把目的基因PCR一下,然后再酶切,再将表达载体也用相同的酶切一下,露出相同的粘性末端,再连到表达载体上,转入感受态细胞中,增殖表达,SDS-PAGE验证。我想问下这个PCR引物是怎么设计呀,有什么要求,而且怎么保证酶切不会切断目的基因呢,表达产物又该怎么检测?
谢谢各位了~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jane_Eyre

新虫 (初入文坛)

首先,你要分析一下你的目的基因,看是否含有你要用的酶的酶切位点,一面被切断,确定没有酶切位点之后,再设计引物, 目的基因两端的引物要添加相应的酶切位点和酶所对应的保护碱基就可以
不忘初心
7楼2014-08-26 09:55:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

karlgu18

新虫 (小有名气)

兄弟,你确定你在这儿应助。我觉得这些东西你问问你老板,他应当知道你没做过,或者直接找你们学校的做过分子生物学的人。这个比较简单的。
2楼2012-12-06 10:42:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

午夜的月光

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励新虫交流! 2012-12-07 11:52:01
引物设计有几个原则,去查一下书,很好查。最重要的是退火温度和引物自身不要成二聚体(DNA MAN 等软件可以分析)。在目的基因上下游各选取25个左右的碱基,注意目的基因的正负链,利用DNA MAN分析即可。用软件分析目的基因的酶切位点,在引物两端加酶切位点的时候不要有目的基因内酶切位点。表达产物一是看蛋白胶条带,若是酶,可以进一步测酶活
3楼2012-12-06 17:07:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一面之缘1988

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by karlgu18 at 2012-12-06 10:42:52
兄弟,你确定你在这儿应助。我觉得这些东西你问问你老板,他应当知道你没做过,或者直接找你们学校的做过分子生物学的人。这个比较简单的。

呵呵  也是~~不过老板忙 主要是外面的业务~~师兄我已经麻烦到不好意思再麻烦的地步了 呵呵 不过我也觉得得再厚脸皮一下了~
4楼2012-12-07 09:41:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 青基如何破局 +3 lyz123lyz 2026-08-27 4/200 2026-08-27 13:08 by kulium
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见