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tankleiming新虫 (小有名气)
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[求助]
puc18 载体的疑问
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大家好啊== 我问下takara 的puc18载体的目的片段到底是连载什么位置？说明书上也没有， 酶切验证是否连接应该怎么验证？ 用什么酶？ 懂行的回答 ，谢谢大家啊，我刚开始做分子，不大了解 |
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【答案】应助回帖
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tankleiming: 金币+20 2012-12-18 17:33:18
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tankleiming: 金币+20 2012-12-18 17:33:18
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1 说明书上有载体图谱呀，有T克隆位点，因为PCR的时候会在你的基因3‘末端加上A，T载体就是根据T和A配对进行连接的。你的目的基因上的A和载体上的T配对，这样目的基因就连接到载体里面了。T克隆位点是经过酶切得到的，这个你不用考虑，你可以仔细看下那个图谱。 2 酶切验证，一种是自己设计引物时加上酶切位点，这个酶切位点一定要是你的序列中没有的酶切位点，最好载体上也没有，这样克隆之后进行双酶切，就会把你的目的片段和载体分离开，电泳验证大小即可。另一种就是利用载体上的酶切位点进行双酶切，这个我没有研究过，你可以查查资料看。 |
5楼2012-12-04 13:34:58
