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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot 烧膜是什么原因
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yicao917

木虫 (小有名气)

[交流] western blot 烧膜是什么原因

western显色后像actin这样强的条带往往会在膜上留下一条褐色肉眼可见的条带，请问这是什么原因？对结果有没有影响？
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1楼 2012-12-03 12:57:10
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porphybaby

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-03 16:39:09
其实是没有的~~~而且这个黄斑的出现就是说明你的条带够强，蛋白够多，信号是很好的。

它是由于你蛋白的浓度太高，ECL的化学发光反应进行得太快，然后又来不及扩散所致。

一般不会影响结果的，但是你就要注意曝光时间的控制了~~~
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2楼2012-12-03 15:13:40
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yicao917

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by porphybaby at 2012-12-03 15:13:40
其实是没有的~~~而且这个黄斑的出现就是说明你的条带够强，蛋白够多，信号是很好的。

它是由于你蛋白的浓度太高，ECL的化学发光反应进行得太快，然后又来不及扩散所致。

一般不会影响结果的，但是你就要注意曝 ...

是ECL的产物来不及扩散吗？若是能扩散的话为何用TBST或者甲醇都不能洗掉呢？
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3楼2012-12-04 00:33:02
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resurgam

木虫 (著名写手)
看不到图片
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4楼2012-12-04 04:51:32
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jue_wang

金虫 (正式写手)
★
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蛋白量太多，可以减量做
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5楼2012-12-05 10:53:49
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DIANDIAN12

铜虫 (初入文坛)
★
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蛋白量太多，曝光时间过长。这种照片很多时候黑色条带内部会有白色空白区域，信号太强了。
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6楼2014-09-11 16:53:48
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DIANDIAN12

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
曝光时间太长了，减短时间，用曝光机的话Actin一般曝光2秒、5秒就可以了。图片能用就可以，如果拍的时候中间信号太强成了红色，保存后的图里红色显示的是白色，会中空。
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7楼2015-04-16 10:18:10
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