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wei_suzhen

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[求助] 质粒提取酶切 T载体与目的基因

用最近TaKaRa的pMD18-T Vector和目的基因（1257bp）连接,然后用氯化钙制备的大肠杆菌感受态细胞、然后转化，今天提质粒，电泳图如上，marker是5000bp。为什么条带不亮？在1500bp和2000bp出现条带是什么？在3000bp和5000bp出现的又是什么？
另一个图是对提取的比较亮的质粒进行双酶切结果，为什么在1500bp和2000bp出现条带？在2000bp和3000bp的是什么带？
双酶切电泳图

质粒提取电泳图

[ Last edited by wei_suzhen on 2012-11-30 at 20:05 ]

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1楼2012-11-30 19:33:42

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wei_suzhen

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引用回帖:

3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-01 08:33:13
正如2L说的，RNA太多，最好消化一下再跑电泳做酶切。1500bp的是pMD18-T空载体超螺旋质粒，2000bp的是需要的阳性克隆超螺旋质粒，3000bp是载体开环质粒，5000bp是阳性克隆开环质粒。酶切反应不完全，效果不好，有没切 ...

pMD18-T不是2692bp吗？质粒没切开，一般原因有哪些？