24小时热门版块排行榜    

查看: 2272  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wei_suzhen

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取 酶切 T载体与目的基因

用最近TaKaRa的pMD18-T Vector和目的基因(1257bp)连接,然后用氯化钙制备的大肠杆菌感受态细胞、然后转化,今天提质粒,电泳图如上,marker是5000bp。为什么条带不亮?在1500bp和2000bp出现条带是什么?在3000bp和5000bp出现的又是什么?
        另一个图是对提取的比较亮的质粒进行双酶切结果,为什么在1500bp和2000bp出现条带?在2000bp和3000bp的是什么带?
双酶切电泳图



质粒提取电泳图

[ Last edited by wei_suzhen on 2012-11-30 at 20:05 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
scelab: 金币+4, 谢谢交流 2012-12-01 10:26:47
正如2L说的,RNA太多,最好消化一下再跑电泳做酶切。1500bp的是pMD18-T空载体超螺旋质粒,2000bp的是需要的阳性克隆超螺旋质粒,3000bp是载体开环质粒,5000bp是阳性克隆开环质粒。酶切反应不完全,效果不好,有没切开的质粒。
3楼2012-12-01 08:33:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
scelab: 金币+3, 谢谢交流 2012-11-30 22:50:27
你的质粒提取液里没有加RNA酶吧,RNA太多,电泳时EB被结合,质粒自然不亮,也会影响酶切结果。
2楼2012-11-30 21:49:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei_suzhen

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-11-30 21:49:10
你的质粒提取液里没有加RNA酶吧,RNA太多,电泳时EB被结合,质粒自然不亮,也会影响酶切结果。

嗯,没加RNA没加酶
4楼2012-12-01 09:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei_suzhen

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-01 08:33:13
正如2L说的,RNA太多,最好消化一下再跑电泳做酶切。1500bp的是pMD18-T空载体超螺旋质粒,2000bp的是需要的阳性克隆超螺旋质粒,3000bp是载体开环质粒,5000bp是阳性克隆开环质粒。酶切反应不完全,效果不好,有没切 ...

pMD18-T不是2692bp吗?质粒没切开,一般原因有哪些?
5楼2012-12-01 09:28:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+5 David1982 2026-10-13 8/400 2026-10-14 21:38 by lhw_GPA4.0
[硕博家园] 中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理 +3 sujiner 2026-10-08 4/200 2026-10-14 20:40 by qicaiyun
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +3 xqy2009 2026-10-13 3/150 2026-10-14 20:17 by 43358052
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[有机交流] 各位大佬,路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些? +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
请填处理意见