应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达不出来是怎么回事？
131/2返回列表12下一页
查看: 4265  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

linsui1989

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达不出来是怎么回事？

我最近在做蛋白表达，重组质粒测序正确，但是表达出来和空载体一模一样，没有目的带，请问是怎么回事？

我用的是pet32a载体，酶切位点是BamH1和Xhol1,诱导温度是37度，IPTG浓度1mmol/L, 菌株为rosseta,全菌电泳
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验技巧相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-30 15:19:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

姑射藐藐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
linsui1989: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-04 15:05:40
第一步：确定载体序列是否正确，启示子、终止子、读码框等；
第二步：确定操作步骤是否正确，如载体是否被污染，是否成功转化入rossetta，抗生素是否正确等；
第三步：核对目的基因序列，与大肠杆菌常用密码子作对比，优化密码子；
第四步：以上三步没有问题时，若还不表达，更换载体；
第四步：更换载体还不表达，选择GST、MBP、SUMO、GB1等助溶标签融合表达。
另外，当目的蛋白太小或太大时可能都不易表达：小肽易被降解；太长例如大的膜蛋白等表达量往往也很难优化。
当然，表达温度以及诱导时间也会对蛋白的可溶表达有一定影响~ 但一般不会导致0和1的差别~
祝实验顺利~
赞一下(6人) 回复此楼
7楼2012-12-02 12:52:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

小河虾

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基因序列有没有稀少密码子?
赞一下 回复此楼
God helps the man who helps himself
2楼2012-11-30 15:32:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihaizhen

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个真不好说，说明没有表达，载体的启动子区域除了问题，不然，如果目的基因连上，肯定有诱导表达的条带的
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-30 15:38:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiefl1984

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能有很多种情况，是不是发酵过程中质粒丢失了。
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-30 16:37:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2010221006

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在翻译的过程中受到阻碍
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-30 17:10:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飒飒东风

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大三学生  飘过  。
1受体细胞选择要多样性
2.你确定导入到受体细胞了并随之稳定遗传复制。
3.是不是被受体细胞排斥啊  多试几个受体。
赞一下 回复此楼
和气生财研究也是
6楼2012-12-02 00:03:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从楼主的条件来分析，温度，IPTG浓度都已经挺高了，温度试试降低一点看看，试试30摄氏度，27摄氏度之类的……
Rosseta本来就是用来表达稀有密码子的受体细胞，一般来说很难表达的基因在Rosseta里面都可以表达的，你可以试试换下受体细胞，个人觉得Rosseta已经是很强悍的受体细胞了.
再个就要从楼主的表达载体的构建分析了，再仔细分析一下构建好的表达载体，测序没？把测序结果好好分析一下，确定一下启动子，跟阅读框没有出问题.实在不行换个表达载体吧，这是下下策了，换载体很多东西都要重新考虑，换个pGEX系列吧，GST融合表达.
祝楼主好运
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
8楼2012-12-02 13:47:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

first-006

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2012-12-08 02:00:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2013-04-26 20:25:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linsui1989 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 5/250 2026-09-01 05:45 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭