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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 扩增已知序列旁邻的未知DNA序列
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wuxiaoyan06

金虫 (小有名气)

[求助] 扩增已知序列旁邻的未知DNA序列

本人最近在扩增一个未知基因，已经得到了它其中的一个片段，想知道它两端的序列，想请教哈用TAIL-PCR方法（hiTAIL-PCR）能否扩增出我想要的条带，不知道这个方法行不行得通，效率高不，谢谢各位指点了！
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1楼 2012-11-30 15:04:38
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
问题需要进一步描述清楚，你是要扩增cDNA序列还是基因组序列？
如果是cDNA序列，可以做RACE，5‘和3’ RACE
如果是基因组序列，可以用iPCR来做

希望对你有用
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-30 15:34:09
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wuxiaoyan06

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-30 15:34:09
问题需要进一步描述清楚，你是要扩增cDNA序列还是基因组序列？
如果是cDNA序列，可以做RACE，5‘和3’ RACE
如果是基因组序列，可以用iPCR来做

希望对你有用

我是扩增某个基因的全长，提的是DNA，请问哈iPCR是什么哦，能不能讲明白点呢，谢谢了！
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3楼2012-11-30 15:40:52
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wuxiaoyan06

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-30 15:34:09
问题需要进一步描述清楚，你是要扩增cDNA序列还是基因组序列？
如果是cDNA序列，可以做RACE，5‘和3’ RACE
如果是基因组序列，可以用iPCR来做

希望对你有用

想问哈iPCR具体怎么弄，本人未做过这方面的，不是很懂，还愿指点，谢谢了！
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4楼2012-11-30 16:32:48
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不建议作ipcr，还要摸条件，现在不缺钱，买宝生物的TAIL-pcr试剂盒，稳定性比较好，但是侧翼能扩多长就看运气了。
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5楼2012-11-30 20:50:58
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titus0805

铁虫 (小有名气)
一般都是TAIL-PCR做完了觉得太短才用ipcr继续延的。
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6楼2012-11-30 21:05:02
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by wuxiaoyan06 at 2012-11-30 16:32:48
想问哈iPCR具体怎么弄，本人未做过这方面的，不是很懂，还愿指点，谢谢了！...

iPCR就是inverse PCR,环化PCR，留个邮箱给你protocol，PM我
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2012-11-30 22:42:45
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wuxiaoyan06

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-30 22:42:45
iPCR就是inverse PCR,环化PCR，留个邮箱给你protocol，PM我...

谢谢了，我的邮箱是wuxiaoyan6@126.com
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8楼2012-12-01 09:05:13
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动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用TAIL-PCR，只要引物设计好了就没问题
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好好学习
9楼2012-12-01 09:15:11
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wuxiaoyan06

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 动力泉 at 2012-12-01 09:15:11
可以用TAIL-PCR，只要引物设计好了就没问题

那兼并引物怎么设计啦，谢谢了
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10楼2012-12-01 11:45:45
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