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血小板释放5-羟色胺
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请问：测定血小板释放的5-羟色胺操作步骤中，后续的步骤中，请详细解答一下各操作的作用，万分的感谢，不了解操作步骤中加入的试剂的用途或作用，望大家不吝赐教，感激涕零。 "取大鼠分离得PRP, PRP（富血小板）给药三分钟后，然后加入胶原30ULcollagen，诱导反应5min，加入50uM的吲哚美辛20ul，于冰浴中终止反应，聚集后的PRP200r/min离心5min，取上清液于-20℃保存，按试剂盒说明测定TXB2的含量。" 上述中加吲哚美辛的作用及原因？ 按常规方法制备PRP和PPP。加诱导剂作用5min后离心（1200g，100min），取上清液聚集后的PRP。分别取0.4mlPRP、PPP和聚集后PPP与0.1ml0.5%tritonX-100混合，然后加入3ml酸化正丁醇，振荡混匀。离心（1200g，5min）。取有机相2.5ml，加入正庚烷5ml，0.1%半胱氨酸1ml，振荡混匀，离心（1200g，5min）。弃去有机相，取水相0.5ml，加入0.004%OPT溶液3ml，置沸水浴15min，冷却后以荧光光度计测定荧光强度（激发365nm，发射光480nm）。 取大鼠分离得PRP, PRP（富血小板）给药三分钟后，然后加入胶原30ULcollagen，诱导反应5min，反应混合液 500 g离心 10 min， 取上清 0.3 mL为测定样品，并平行测定 0.3 mL 0.5 mg/L 5-HT 标准溶液荧光数据。各实验管分别依次加入 TTBSA 0.7 mL 及 100% 三氯乙酸 0.3 mL 混匀， 1 500 g 离心 20 min， 取上清 0.5 mL， 各加入 OPT/HCI液 2 mL 混匀， 沸水浴煮10 min， 冰水冷却 10 min， 各加三氯甲烷 2 mL 混匀，1 500 g离心 20 min， 各取上清 1 mL 测定荧光。 上述红色标记的物质的作用及原因？ 请了解的予与解答，万分感谢 [ Last edited by dylfgs on 2012-12-4 at 19:28 ] |
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