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血小板释放5-羟色胺
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请问:测定血小板释放的5-羟色胺操作步骤中,后续的步骤中,请详细解答一下各操作的作用,万分的感谢,不了解操作步骤中加入的试剂的用途或作用,望大家不吝赐教,感激涕零。 "取大鼠分离得PRP, PRP(富血小板)给药三分钟后,然后加入胶原30ULcollagen,诱导反应5min,加入50uM的吲哚美辛20ul,于冰浴中终止反应,聚集后的PRP200r/min离心5min,取上清液于-20℃保存,按试剂盒说明测定TXB2的含量。" 上述中加吲哚美辛的作用及原因? 按常规方法制备PRP和PPP。加诱导剂作用5min后离心(1200g,100min),取上清液聚集后的PRP。分别取0.4mlPRP、PPP和聚集后PPP与0.1ml0.5%tritonX-100混合,然后加入3ml酸化正丁醇,振荡混匀。离心(1200g,5min)。取有机相2.5ml,加入正庚烷5ml,0.1%半胱氨酸1ml,振荡混匀,离心(1200g,5min)。弃去有机相,取水相0.5ml,加入0.004%OPT溶液3ml,置沸水浴15min,冷却后以荧光光度计测定荧光强度(激发365nm,发射光480nm)。 取大鼠分离得PRP, PRP(富血小板)给药三分钟后,然后加入胶原30ULcollagen,诱导反应5min,反应混合液 500 g离心 10 min, 取上清 0.3 mL为测定样品,并平行测定 0.3 mL 0.5 mg/L 5-HT 标准溶液荧光数据。各实验管分别依次加入 TTBSA 0.7 mL 及 100% 三氯乙酸 0.3 mL 混匀, 1 500 g 离心 20 min, 取上清 0.5 mL, 各加入 OPT/HCI液 2 mL 混匀, 沸水浴煮10 min, 冰水冷却 10 min, 各加三氯甲烷 2 mL 混匀,1 500 g离心 20 min, 各取上清 1 mL 测定荧光。 上述红色标记的物质的作用及原因? 请了解的予与解答,万分感谢 [ Last edited by dylfgs on 2012-12-4 at 19:28 ] |
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