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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] PCR条带极弱,二聚体很亮,应如何调整? 已有1人参与

PCR条带极弱,二聚体很亮,应如何调整?53度只有二聚体无目的带,54,55度二聚体亮,目的带极弱,在紫外灯下看不清楚!应如何调整退火温度呢?
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换好酶(takara probest 能力很强),提高退火温度(60以上)。
生命不息,探索不止。
5楼2012-11-28 22:41:00
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

使用PCR产物(目的带位置正确但暗淡,二聚体较亮)作为二次 PCR的模板,25微升的体系应该加多少呢?
2楼2012-11-28 19:35:51
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-28 19:35:51
使用PCR产物(目的带位置正确但暗淡,二聚体较亮)作为二次 PCR的模板,25微升的体系应该加多少呢?

果断提高退火温度,或者做个降落PCR,把初始温度提高。。。使用PCR产物为模板,可能P不出来哦,因为突变的可能性太大,如果要P就把PCR产物稀释100倍,然后按照正常PCR条件加就行了。。。我试过,这样做特异性不强。。。
keepon
3楼2012-11-28 19:57:42
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adajf

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果目的条带若 稀释50倍试试好了  可以设个梯度pcr看看
4楼2012-11-28 22:19:31
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