应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取DNA出现弥散------求助
211/3返回列表123下一页
查看: 2105  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

素素2008

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取DNA出现弥散------求助

Sample TextSample Text求助：
     小虫做海洋藻类的DNA提取。虽然有条带，但是有很长的弥散拖带，求助：这是什么原因？因为DNA浓度很低，只有20ng/ml,所以模板量加的比较多。有4ul。用mix做的。引物为2ul。
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : Administrator2012-11-2709小时49分钟.jpg
    • 2012-11-27 11:17:55, 162.77 K

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-27 11:21:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品里可能有RNA，弥散的是不完全降解的RNA吧。还有，20ng/ml好像是很低啊，确定不是20ng/ul吗？做PCR模板的话，10-50ng DNA就够了。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

素素2008
2楼2012-11-27 11:56:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

素素2008

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-27 11:56:07
样品里可能有RNA，弥散的是不完全降解的RNA吧。还有，20ng/ml好像是很低啊，确定不是20ng/ul吗？做PCR模板的话，10-50ng DNA就够了。

哦哦。不好意思，是20ng/ul，不小心写错了。不过，提取时加入了RNA酶的。加了两ul。不知道是不是加的少了？
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-27 13:13:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
得看你RNA酶的浓度哈~你这个DNA浓度倒是也能做PCR
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-27 14:35:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

素素2008

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-27 14:35:09
得看你RNA酶的浓度哈~你这个DNA浓度倒是也能做PCR

RNA酶的浓度为：10mg/ml。
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-27 15:56:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
浓度太低了，有污染或降解了。
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-27 16:05:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rongduoyan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-11-27 20:47:52
可能是PCR时，DNA模版浓度高了，也可能是提取DNA是不纯，建议点一个对照就知道了，即为mix换成水，与图中的样本一起跑PCR ，还有如果有扩出目的条带来了话，其实有弥散没关系的，如果怕不纯，可以回收后以其为模版重新第二次PCR 就可以了！
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-27 16:05:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 素素2008 at 2012-11-27 15:56:27
RNA酶的浓度为：10mg/ml。...

这个浓度RNA酶也足够了啊~稀释个十倍五十倍做PCR试试吧~
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-27 18:44:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 欢迎交流经验 2012-11-28 13:42:25
RNase的量应该是可以的，可能是消化不很充分吧。不知道你是从多少藻里提出的这个样品。至于提的量少，最有可能的原因还是最初细胞破碎不完全。不知道你是用什么方法裂解细胞的。你如果只是要用这个DNA做PCR是可以的。你做的是真核藻还是原核藻？如果是原核的，加0.5-1ul模板就可以了，真核加2-5ul吧。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

素素2008
9楼2012-11-28 07:57:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

素素2008

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-28 07:57:46
RNase的量应该是可以的，可能是消化不很充分吧。不知道你是从多少藻里提出的这个样品。至于提的量少，最有可能的原因还是最初细胞破碎不完全。不知道你是用什么方法裂解细胞的。你如果只是要用这个DNA做PCR是可以的 ...

我做的是真核藻，我没有专门破碎细胞的步骤，只是加了些CTAB裂解液温育。老师说，这就算是破碎细胞的过程了。还说藻细胞很容易破裂的。请问虫友，你用的什么方法破碎的？我们是初做，一直在摸索，但效果很不好，不知道是不是破裂细胞这步出了问题。求教！我只是用它做PCR,但是一直做不出来了，成功率非常低，偶尔浓度达到50以上的，条带就很亮？求指教！
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-29 18:37:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 素素2008 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305求调剂 +4 哇卢卡库 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:58 by sanrepian
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +9 稻妻小编 2026-03-26 9/450 2026-03-26 16:16 by 不吃魚的貓
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 296求调剂 +5 www_q 2026-03-20 5/250 2026-03-26 12:56 by 3Strings
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭