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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体构建 碱基突变 缺失 原因
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 表达载体构建 碱基突变 缺失 原因

最近做表达载体构建，总是出现碱基缺失和突变，而且总有突变成终止密码子的情况，请教各位前辈，这到底是怎么回事啊？？？？ 望不吝赐教
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1楼 2012-11-25 15:44:51
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
14楼: Originally posted by 芥末猫 at 2012-11-26 10:34:33
我看说明书上写的好像是中混合酶  因为我那个是改良的载体 跟t载体似的，我合计加a正好啊   它跟我之前用的一个酶  我看保真性写的一样的啊...

你那个应该是taq+pfu的混合酶，保真能力比pfu差，但要比taq好，纯高保真酶的话是不会加A的，反而会切掉A尾，很多国产公司都在推销这种混合酶，我用过天根的taq plus，很烂，加A效率奇差，还不如pfu扩增自己加A，我估计你是循环太多了，试试28个循环，然后换个高保真酶吧.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
15楼2012-11-26 11:11:13
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polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-11-25 20:33:17
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.
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北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
2楼2012-11-25 17:51:43
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是PCR出现突变，就是Taq酶的问题，建议换个高保真的
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
3楼2012-11-25 19:30:43
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芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by polepolar at 2012-11-25 17:51:43
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.

“很有可能突变后的序列对E.coli有毒”，这个是什么意思？？转化后升温生长，是指涂了平板以后，不在37°过夜，在室温培养出单克隆吗？？谢谢
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4楼2012-11-25 19:31:11
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