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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 表达载体构建 碱基突变 缺失 原因

最近做表达载体构建,总是出现碱基缺失和突变,而且总有突变成终止密码子的情况,请教各位前辈,这到底是怎么回事啊???? 望不吝赐教
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芥末猫

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhoulubin at 2012-11-25 19:30:43
如果是PCR出现突变,就是Taq酶的问题,建议换个高保真的

我用的酶也是说是高保真的,还加A呢 到底保真性需要到什么程度才可以啊
10楼2012-11-26 08:52:36
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polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-11-25 20:33:17
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
2楼2012-11-25 17:51:43
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果是PCR出现突变,就是Taq酶的问题,建议换个高保真的
每个年龄都有其最应该做的事,但只有过了那个年龄自己才知道
3楼2012-11-25 19:30:43
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芥末猫

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by polepolar at 2012-11-25 17:51:43
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.

“很有可能突变后的序列对E.coli有毒”,这个是什么意思??转化后升温生长,是指涂了平板以后,不在37°过夜,在室温培养出单克隆吗??谢谢
4楼2012-11-25 19:31:11
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