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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 想把pET30a的kana抗性基因转入pUC19，p出来连进去就行么？
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wy135033405

木虫 (小有名气)

[求助] 想把pET30a的kana抗性基因转入pUC19，p出来连进去就行么？

如题，pET-30a的kana抗性基因位于4048-4860，那么为了转入pUC19，是否PCR获得两端带有pUC19的多克隆位点所包含的酶切位点的基因序列（位点1---4048-4860---位点2），酶切与pUC19连接就可以呢？kana基因之前是否还有promoter等调控元件？是否需要考虑？
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1楼 2012-11-19 10:32:52
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wy135033405: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-19 14:25:27
要考虑kana基因ORF两端的promoter和转录终止序列
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2楼2012-11-19 12:26:39
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shsDerek

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wy135033405: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-11-19 14:25:46
可能不行，需要考虑前后序列，不然转入的基因起不到作用
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3楼2012-11-19 12:42:31
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wy135033405

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shsDerek at 2012-11-19 12:42:31
可能不行，需要考虑前后序列，不然转入的基因起不到作用

谢谢，请问您是指读码框需要确定还是kana的调控序列？
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4楼2012-11-19 14:23:12
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wy135033405

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-19 12:26:39
要考虑kana基因ORF两端的promoter和转录终止序列

谢谢，能否详细讲解一下？
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5楼2012-11-19 14:25:20
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wy135033405: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 十分感谢！ 2012-11-19 18:45:54
wy135033405: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2012-11-20 12:56:20
引用回帖:
5楼: Originally posted by wy135033405 at 2012-11-19 14:25:20
谢谢，能否详细讲解一下？...

基因楼主从pEGFP-N1上克隆你要的kana的基因，这个载体上的promoter和terminator都界定好了，pET-30a图谱标的不是很清楚
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2012-11-19 16:11:13
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shsDerek

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wy135033405: 金币+2, ★★★很有帮助, 十分感谢！ 2012-11-19 18:46:12
引用回帖:
4楼: Originally posted by wy135033405 at 2012-11-19 14:23:12
谢谢，请问您是指读码框需要确定还是kana的调控序列？...

主要是调控部分，但该kan基因导入别的载体是否起作用需要你自己尝试，最好还是换个载体吧
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7楼2012-11-19 18:22:14
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gyesang

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引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-19 16:11:13
基因楼主从pEGFP-N1上克隆你要的kana的基因，这个载体上的promoter和terminator都界定好了，pET-30a图谱标的不是很清楚...

楼主要是没有pEGFP-N1这个载体，给我发站内信，我给你
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2012-11-19 20:56:53
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ducktk

金虫 (初入文坛)
我之前将pCola-duet载体上的kana基因片段P下来连到其他载体上，可以表达。
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9楼2012-12-23 10:49:00
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胡笑轲

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ducktk at 2012-12-23 10:49:00
我之前将pCola-duet载体上的kana基因片段P下来连到其他载体上，可以表达。

我讲Apr片段连到PUC19上，试了好几次，感觉不能表达的。。。
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10楼2014-04-10 11:07:26
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