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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

[求助] 脂质体稳转细胞的问题!!!!!!

请问脂质体转染细胞,外源DNA有多大几率整合进细胞的基因组啊?如何提高整合的几率呢?还有稳转是磷酸钙转染好还是脂质体好呢?我的细胞挺好转染的。谢谢~
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Only the strong survive.
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448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-19 13:52:47
你的意思你要进行的是稳转而不是顺转咯,我想应该是脂质体比较好啦,至于你说的整合进基因组的概率很小,要不停的做,不停的改变条件(致死浓度之类的)才有可能会成功
万物皆有毒,只要剂量足
2楼2012-11-19 08:24:41
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
选择脂质体转染的效率一般还是可以的,细胞转染,关键在一些固定的操作,以及转染时间的控制
3楼2012-11-21 12:18:07
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 448935271 at 2012-11-19 08:24:41
你的意思你要进行的是稳转而不是顺转咯,我想应该是脂质体比较好啦,至于你说的整合进基因组的概率很小,要不停的做,不停的改变条件(致死浓度之类的)才有可能会成功

请问你指的致死浓度是哪个方面的?脂质体?
Only the strong survive.
4楼2012-11-21 16:11:32
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henryxue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 暖暖暖 at 2012-11-21 16:11:32
请问你指的致死浓度是哪个方面的?脂质体?...

指的是你质粒上所带的抗性,比如puromycin,neomycin等抗性基因,不同的抗性基因所使用的药和浓度也不相同,各个细胞系间差别也很大
5楼2012-11-21 21:04:25
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

你可以选用慢病毒载体,然后用lipo转,这样载体往细胞基因组上整合的概率比较大
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2012-11-21 22:26:19
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448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 暖暖暖 at 2012-11-21 16:11:32
请问你指的致死浓度是哪个方面的?脂质体?...

我说的致死浓度不是脂质体,4楼已经回答得挺详细的了
万物皆有毒,只要剂量足
7楼2012-11-22 14:18:53
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 448935271 at 2012-11-22 14:18:53
我说的致死浓度不是脂质体,4楼已经回答得挺详细的了...

好的,非常感谢!
Only the strong survive.
8楼2012-11-22 21:06:43
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by henryxue at 2012-11-21 21:04:25
指的是你质粒上所带的抗性,比如puromycin,neomycin等抗性基因,不同的抗性基因所使用的药和浓度也不相同,各个细胞系间差别也很大...

顺便问下质粒要线性化吗?谢谢~
Only the strong survive.
9楼2012-11-22 21:07:32
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henryxue

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 暖暖暖 at 2012-11-22 21:07:32
顺便问下质粒要线性化吗?谢谢~...

应该不用吧,就是正常的转染,而且越是超螺旋的转染效果越好吧
10楼2012-11-23 07:54:36
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