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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

[求助] DNA琼脂糖凝胶电泳

我提了枇杷叶的DNA ,测的OD值在2.12,是蛋白没除干净还是RNA的干扰?还有0.8%的琼脂糖凝胶电泳出现了好几条条带是什么原因呢?是双链断了吗?
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haha
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wxlzzzz at 2012-11-17 09:38:50
楼主,不能认定其他的条带就一定是断裂的DNA片段,最好做几个验证试验。加点RNA酶试一试,或者故意在提取的时候加大机械搅拌,有时候失败的实验是一种很好的参照经验啊。建议先做添加RNA酶的,因为你的OD比值的确高 ...

用异丙醇及无水乙醇沉淀时能看到明显沉淀,用RNA酶消解后就看不到沉淀了,是怎么回事啊?我沉淀的方法是,风干后的DNA加0.5ml(0.5ulRNA酶)的TE溶解,55度放置1h,加入等体积的氯仿/异戊醇抽提1次,12000r/min,10min,再加1/3体积异丙醇及2倍体积无水乙醇(均预冷)沉淀-20度放置30min看不到沉淀,离心后还是没有,怎么办?
haha
13楼2012-11-28 17:01:51
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wxlzzzz

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-19 13:35:57
楼主想表达的不是OD值吧,和DNA纯度有关系的是OD260/OD280和OD260/OD230这两个参数。
OD260/0D280=1.8时,理论值,DNA纯净。小于1.8有蛋白或者酚类污染,大于1.8有RNA污染。
基因组DNA长度长,提取过程中很容易断开成小段,楼主提取时候要注意这点。祝好运。

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你做了什么,什么都没做。
2楼2012-11-15 23:48:40
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hourl11

禁虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
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3楼2012-11-16 08:57:25
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haiyanli1988

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的RNA去除干净了吗?RNA没有除干净跑胶会出现几天带很正常啊,OD值2.12,说明你的样品有RNA污染。

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4楼2012-11-16 11:07:46
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