应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆一个未知基因，3‘端和5'端拿不完整怎么办？
51/1返回列表
查看: 2448  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)

[交流] 克隆一个未知基因，3‘端和5'端拿不完整怎么办？

我是克隆一个未知的基因，首先拿到了大概1200BP的中间保守区，然后做3'  5'RACE，因为这个基因相近物种中还没有确切的公布，只有预测的，并且还长短不一，我也不知道3'端该有多长，5'端又该有多长。做RACE出现的条带有一大堆。我最终是想做表达看能不能表达的，这样子不用纠结3'端和5'端是不是走到头了对吗？因为这个基因CDS也就一千多点，编码的蛋白也就五百多个氨基酸。有谁能给我建议建议，谢谢。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子问题及解决方案汇总

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-11-14 09:58:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 天蛇2012 at 2012-11-20 10:54:22
用RACE做应该没问题，扩完进行ＴＡ克隆，测序看看

谢谢。
回复此楼
15楼2012-11-20 11:43:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

quintas

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fengyunqb: 金币+2 2012-11-14 11:30:31
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-14 16:42:13
可以考虑分成两段做RACE, 拼接的时候注意一下就可以了。
建议直接PCR, P不出来再RACE, 酶可以用高保真的。
NCBI查一查, 比对一下亲缘关系, 在保守区设计引物, 个人认为效果比RACE好。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-14 10:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by quintas at 2012-11-14 10:29:34
可以考虑分成两段做RACE, 拼接的时候注意一下就可以了。
建议直接PCR, P不出来再RACE, 酶可以用高保真的。
NCBI查一查, 比对一下亲缘关系, 在保守区设计引物, 个人认为效果比RACE好。

恩，是的，但是RACE就是PCR啊，先反转录，然后PCR，用特异性引物和接头引物，做曹氏PCR。我想能拿多少算多少吧，实验纠结 太完美累死了。谢谢帮忙。
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-14 11:30:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

31569218

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fengyunqb: 金币+1 2012-11-15 13:14:57
3‘端是否完整还是容易，至于5’端看有无你所用的街头引物就好了啊
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-14 12:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭