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woshi212

金虫 (小有名气)

[求助] 请教大家一下,酵母发酵体系下,如何提取NADH和NAD+,还有就是测定方法是什么,求助啊

如题,正在做酵母发酵体系,想在代谢过程中监测辅酶NADH和NAD+的含量,求提取方法,以及使用HPLC如何准确建立测试方法啊,可以推荐文献也可以哈,可以加金币的,刚玩不久,请原谅
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nothing!!!
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suliqiu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 看天 at 2013-12-13 10:36:05
我是2ml菌体离心加500ul 0.2M的NaOH提取之后再加等体积的0.1MHCl回调...

恩,知道了,您用的是细菌吧,咱差不多~谢谢哈~这下心里有底了~
8楼2013-12-13 11:24:52
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查看全部 13 个回答

woshi212

金虫 (小有名气)

希望大家,给点意见,很着急,我是新手
nothing!!!
2楼2012-11-14 09:48:43
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看天

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
woshi212: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-16 16:19:26
我们用 enzyme cyclying assay的时候提取:取样离心后加0.2mNaOH 50摄氏度水浴10min用于提取NAD(P)H ;若提取NAD(P)用HCl就好了,后续分析时在用0.1m的酸或碱小心地调回来;
有写用TCA(三氯乙酸)萃取的 然后做HPLC分析 你可以查一下文献
戒嗔怒以养肝气,省言语以养神气,多读书以养质气,顺时令以养元气,不拘节以养大气,观天变以养灵气,莫强求规于运气。
3楼2012-11-14 14:34:51
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woshi212

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 看天 at 2012-11-14 14:34:51
我们用 enzyme cyclying assay的时候提取:取样离心后加0.2mNaOH 50摄氏度水浴10min用于提取NAD(P)H ;若提取NAD(P)用HCl就好了,后续分析时在用0.1m的酸或碱小心地调回来;
有写用TCA(三氯乙酸)萃取的 然后做HP ...

你是用酶循环法的吧,这方法是否可以区分NADH和NADPH,我是想做液相,但是我不知这个提取方法是否可以直接使用到液相中,会不会因为盐离子浓度高二伤害柱子,还有就是非常谢谢你,请问酶循环法效果怎么样?
nothing!!!
4楼2012-11-15 11:16:54
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