| 查看: 1392 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
ELISA问题求助
|
||
|
在调试ELISA试剂盒的过程中，经常碰到别人说酶稀或者标准品内添加的有PPR，这个PPR 到底是什么呀？恳请各位解答~ 金币太少了，大家见谅啊~ |
回复此楼» 猜你喜欢
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有3人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有4人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
-
AI论文写作工具：是科研加速器还是学术作弊器？
已经有3人回复
-
孩子确诊有中度注意力缺陷
已经有6人回复
-
2026博士申请-功能高分子，水凝胶方向
已经有6人回复
-
论文投稿，期刊推荐
已经有4人回复
-
硕士和导师闹得不愉快
已经有13人回复
-
请问2026国家基金面上项目会启动申2停1吗
已经有5人回复
-
同一篇文章，用不同账号投稿对编辑决定是否送审有没有影响？
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
ELISA实验求助
已经有2人回复- 求助大家Elisa实验问题~
已经有12人回复
- Elisa问题求助，偶是新人，木有多少金币请大家原谅哈
已经有0人回复
- 菜鸟求助ELISA中的几个问题
已经有1人回复
- 小鼠ELISA和流式细胞实验问题求助
已经有8人回复
- 求助各位大神解答！ELISA检测藻毒素试剂盒的相关问题。
已经有3人回复
- ELISA问题求助
已经有6人回复
- ELISA实验结果求助
已经有7人回复
- 求助ELISA试剂盒测试相关蛋白问题
已经有0人回复
- 求助Elisa实验捕获后的洗脱问题
已经有4人回复
- 【求助】关于Rat cyclic adenosine monophosphate(cAMP) Elisa Kit 的几个问题
已经有2人回复
- 求助：关于ELISA
已经有3人回复
- 求助个关于ELISA试剂盒的问题
已经有0人回复
- ELISA原理问题的求助
已经有4人回复
- 求助多克隆抗体效价检测阴性对照问题（Elisa）
已经有2人回复
- 竞争法ELISA检测小肽类抗原问题求助
已经有3人回复
- 求助ELISA实验中OPD的显色时间问题
已经有1人回复
- 求助ELISA样品制备和一个单位问题
已经有2人回复
- 【求助/交流】ELISA实验中的问题
已经有6人回复
- 【求助】有关elisa的问题，做过elisa的学长学姐指点下。。。
已经有5人回复
- 【求助/交流】有关elisa的问题，做过elisa的学长学姐指点下。。。
已经有6人回复
- 【求助】关于ELISA的问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】血清Elisa相关问题
已经有5人回复
7楼2015-01-28 12:05:24
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
google上搜的，希望对你有用 人抗小反刍兽疫抗体（PPR）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人抗小反刍兽疫抗体（PPR）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗小反刍兽疫抗体（PPR）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），判断样品中是否含有人抗小反刍兽疫抗体（PPR）。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 1. 酶标仪（450nm） 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3. 预处理后的样本无需稀释，直接取50μL加样即可。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无 阴性对照 0.5mL 0.5mL 无 阳性对照 0.5mL 0.5mL 无 检测抗体-HRP 10mL 5mL 无 20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释 底物A 6mL 3mL 无 底物B 6mL 3mL 无 终止液 6mL 3mL 无 封板膜 2张 2张 无 说明书 1份 1份 无 自封袋 1个 1个 无 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。 2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。 操作步骤 1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL； 3. 待测样本孔加待测样本50μL； 4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。 结果判断 1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00； 阴性对照孔OD值平均值≤0.15。 2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15 3. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性 4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性 试剂盒性能 1. 准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。 2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。 4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。 5. 有效期：6个月 |
2楼2012-11-12 20:42:44
3楼2012-11-12 23:08:44
wizardfan
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 18
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 1.818
- 金币: 24624.2
- 散金: 197
- 红花: 48
- 沙发: 2
- 帖子: 2254
- 在线: 400.7小时
- 虫号: 1879241
- 注册: 2012-07-05
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
4楼2012-11-13 08:14:12