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[求助]
ELISA问题求助
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在调试ELISA试剂盒的过程中，经常碰到别人说酶稀或者标准品内添加的有PPR，这个PPR 到底是什么呀？恳请各位解答~ 金币太少了，大家见谅啊~ |
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3楼2012-11-12 23:08:44
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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google上搜的，希望对你有用 人抗小反刍兽疫抗体（PPR）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人抗小反刍兽疫抗体（PPR）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗小反刍兽疫抗体（PPR）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），判断样品中是否含有人抗小反刍兽疫抗体（PPR）。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 1. 酶标仪（450nm） 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3. 预处理后的样本无需稀释，直接取50μL加样即可。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无 阴性对照 0.5mL 0.5mL 无 阳性对照 0.5mL 0.5mL 无 检测抗体-HRP 10mL 5mL 无 20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释 底物A 6mL 3mL 无 底物B 6mL 3mL 无 终止液 6mL 3mL 无 封板膜 2张 2张 无 说明书 1份 1份 无 自封袋 1个 1个 无 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。 2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。 操作步骤 1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL； 3. 待测样本孔加待测样本50μL； 4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。 结果判断 1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00； 阴性对照孔OD值平均值≤0.15。 2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15 3. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性 4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性 试剂盒性能 1. 准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。 2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。 4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。 5. 有效期：6个月 |
2楼2012-11-12 20:42:44
wizardfan
至尊木虫 (著名写手)
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4楼2012-11-13 08:14:12
berniehuang
铁杆木虫 (正式写手)
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- 红花: 3
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5楼2012-11-13 10:07:21