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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 亲们,你们做定点突变么?

最近在做定点突变,用的trans的定点突变的试剂盒,但是就是没有条带,我是希望在病毒基因组全场位置上突变两个碱基,有做过的人,能稍微知道下么,病毒基因组加上质粒载体一共12k,trans公司的人说可能是由于模板比较大的原因,你们做定点突变都是怎么做的,有什么经验能分享么,每次PCR都是P不出来,快郁闷死了。。。
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
31楼: Originally posted by zhoumin1108 at 2012-11-22 09:41:20
LZ你问题解决了吗?如果没解决,把你要突变的序列和位点发到我邮箱,zhoumin1108@gmail.com, 我帮你设计....

最近还在倒腾中呢,我是连到19T上然后再做定点突变的,刚转化,还没提质粒鉴定呢,你真好,谢谢你哈,回头还是弄不出来再向您讨教讨教经验啊,我的邮箱miaoqiuhong1989@163.com,回头弄不出来让您帮忙时候不要把我的邮件放到垃圾箱哈
32楼2012-11-22 20:10:22
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议在T载体上突变好了再连目标载体,载体太大了,PCR不大容易
2楼2012-11-11 11:14:58
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polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 编辑内容 2013-05-29 19:30
确实是因为模板太大的原因,现有的聚合酶扩增不了这么大的片段,建议交给公司做吧

[ Last edited by gyesang on 2013-5-29 at 19:30 ]
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
3楼2012-11-12 14:29:44
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuan6126 at 2012-11-11 11:14:58
建议在T载体上突变好了再连目标载体,载体太大了,PCR不大容易

在T载体上做好突变?这样子是不是比较容易?你之前有做过么,有成功的例子没?
4楼2012-11-12 15:54:32
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