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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 亲们，你们做定点突变么？
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 亲们，你们做定点突变么？

最近在做定点突变，用的trans的定点突变的试剂盒，但是就是没有条带，我是希望在病毒基因组全场位置上突变两个碱基，有做过的人，能稍微知道下么，病毒基因组加上质粒载体一共12k,trans公司的人说可能是由于模板比较大的原因，你们做定点突变都是怎么做的，有什么经验能分享么，每次PCR都是P不出来，快郁闷死了。。。
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1楼 2012-11-10 17:45:31
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zhoumin1108

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

做点突变根本不需要kit,也不需要PCR全长质粒,用overlapPCR直接PCR突变基因就可以了,还不需要dpnI酶切.
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15楼2012-11-14 13:53:46
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议在T载体上突变好了再连目标载体，载体太大了，PCR不大容易
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2楼2012-11-11 11:14:58
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polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 编辑内容 2013-05-29 19:30
确实是因为模板太大的原因,现有的聚合酶扩增不了这么大的片段,建议交给公司做吧

[ Last edited by gyesang on 2013-5-29 at 19:30 ]
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北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
3楼2012-11-12 14:29:44
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuan6126 at 2012-11-11 11:14:58
建议在T载体上突变好了再连目标载体，载体太大了，PCR不大容易

在T载体上做好突变？这样子是不是比较容易？你之前有做过么，有成功的例子没？
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4楼2012-11-12 15:54:32
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