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小小佐罗2

木虫 (正式写手)

[求助] 细菌的荧光定量

我准备从粪便总细菌中定量某一种细菌,前面没想好,称量湿粪的时候没有记录,大概都是1g,现在看文献上面都是以拷贝数每单位湿重粪便为单位的,现在我已经没样品了,现在想计算出相对丰度,就是先定量出样品每微升的总细菌的拷贝数,然后定量出某一细菌的拷贝数,然后2个一比得出这种菌在总菌中的百分比作为相对丰度来比较。 不知道这样可行嘛,请各位指点下啊。另外我想标准曲线的制作也有些不明白的地方,我不知道用什么来做标线,我手里没有标准菌株,我可以用特异性引物(比如我需要定量的哪种菌)扩出来的DNA克隆后随便挑个提取质粒稀释做嘛,另外总菌是不是也可以这样那? 第一次做荧光定量细菌,很多东西不太清楚,请各位虫虫指点一二,万分感谢!
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872940890

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

,我可以用特异性引物(比如我需要定量的哪种菌)扩出来的DNA克隆后随便挑个提取质粒稀释做嘛,
这个是可以的  还需要测序  找出插入片段长度 算出标准品的浓度
这种菌在总菌中的百分比作为相对丰度来比较   这个也可以啊

建议先做标曲(不含样品)  技术熟练后 在做样品
我知道我得继续努力!加油!
2楼2013-01-17 16:51:06
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