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caidongjie

银虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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帖子: 36
在线: 12小时
虫号: 1441368

[交流] 外源基因连接载体

请教各位大侠：为什么我连接以后的重组载体质粒PCR有目的条带，但是酶切后什么条带都没有，质粒跑电泳也没有条带，做PCR时用的是一个重组质粒，我的酶切位点是Hind3和Xba1，表达载体是pMG36e。。。。。求助各位大侠们。。。。。

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1楼 2012-11-09 17:29:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

MolEPI: 2
应助: 81 (初中生)
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帖子: 430
在线: 196.7小时
虫号: 1512351

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-11-14 16:38:52

不知道为嘛很多人都不喜欢用酶切去验证，PCR验证是个假阳性概率挺高的方法，只能作为初步筛选疑似阳性菌株，不能作为确定手段.
你这个明显是质粒没有提取成功，按道理5ml的菌液提取出的质粒量很足的，只要菌液不是太稀，点个5ul应该就可以看得很清晰，你还是先从质粒提取上找原因吧，质粒提取电泳都没条带……还做什么酶切呢？