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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 外源基因连接载体
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caidongjie

银虫 (初入文坛)

[交流] 外源基因连接载体

请教各位大侠：为什么我连接以后的重组载体质粒PCR有目的条带，但是酶切后什么条带都没有，质粒跑电泳也没有条带，做PCR时用的是一个重组质粒，我的酶切位点是Hind3和Xba1，表达载体是pMG36e。。。。。求助各位大侠们。。。。。
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1楼 2012-11-09 17:29:14
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by caidongjie at 2012-11-11 18:55:55
谢谢，我平时用5毫升菌液提的，还需要增加菌体量吗？增加多少...

这个5 ml也不大好讲，毕竟OD600可能不同，现在你PCR出来，但质粒酶切没条带，估计你提完质粒没跑电泳看看浓度。
建议：菌体量大点，提完质粒3 ul电泳看看浓度。PS：冬天有些时候质粒提不出来，建议第二步裂解在37°水浴里3min.
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13楼2012-11-13 13:57:27
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竹子小小

木虫 (小有名气)
★
caidongjie(金币+5): 谢谢参与
质粒跑电泳都没有带那就是你质粒没提出来
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caidongjie
2楼2012-11-09 17:44:54
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒的浓度太低了，重新提，菌体量大点
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

caidongjie
7楼2012-11-11 11:22:28
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caidongjie

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-09 17:44:54
质粒跑电泳都没有带那就是你质粒没提出来

谢谢，我用8微升的质粒跑的电泳，可能浓度太低了，PCR只用2微升但是条带很亮，郁闷
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8楼2012-11-11 18:54:56
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