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caidongjie

银虫 (初入文坛)


[交流] 外源基因连接载体

请教各位大侠:为什么我连接以后的重组载体质粒PCR有目的条带,但是酶切后什么条带都没有,质粒跑电泳也没有条带,做PCR时用的是一个重组质粒,我的酶切位点是Hind3和Xba1,表达载体是pMG36e。。。。。求助各位大侠们。。。。。
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by caidongjie at 2012-11-11 18:55:55
谢谢,我平时用5毫升菌液提的,还需要增加菌体量吗?增加多少...

这个5 ml也不大好讲,毕竟OD600可能不同,现在你PCR出来,但质粒酶切没条带,估计你提完质粒没跑电泳看看浓度。
建议:菌体量大点,提完质粒3 ul电泳看看浓度。PS:冬天有些时候质粒提不出来,建议第二步裂解在37°水浴里3min.
13楼2012-11-13 13:57:27
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竹子小小

木虫 (小有名气)



caidongjie(金币+5): 谢谢参与
质粒跑电泳都没有带那就是你质粒没提出来

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2楼2012-11-09 17:44:54
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
质粒的浓度太低了,重新提,菌体量大点

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2012-11-11 11:22:28
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caidongjie

银虫 (初入文坛)


送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-09 17:44:54
质粒跑电泳都没有带那就是你质粒没提出来

谢谢,我用8微升的质粒跑的电泳,可能浓度太低了,PCR只用2微升但是条带很亮,郁闷
8楼2012-11-11 18:54:56
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