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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何判断蛋白酶是酸性蛋白酶还是碱性蛋白酶
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lym8947

铁虫 (小有名气)

[交流] 如何判断蛋白酶是酸性蛋白酶还是碱性蛋白酶 已有5人参与

如题，最近做蛋白酶的实验，看文献中提到产蛋白酶菌株在不同的条件下产的蛋白酶酸碱性也不同，请问一下在不同条件下培养后，如何判断所产的蛋白酶是中性、碱性还是酸性？？？
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1楼 2012-11-06 20:04:14
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回帖置顶 ( 共有1个 )

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★
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rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励交流 2012-11-09 08:43:29
引用回帖:
8楼: Originally posted by lym8947 at 2012-11-08 10:18:38
谢谢，但是我想请问一下测定蛋白酶酶活的时候缓冲液应该是用哪种啊，我看了国标的方法，中性蛋白酶，碱性蛋白酶和酸性蛋白酶所用的缓冲液都是不一样的啊...

Cloning and identification of novel cellulase genes from uncultured microorganisms in rabbit cecum and characterization of the expressed cellulases（封毅AMB2007）
Optimal pH were tested by the enzyme assays at 37°C in buffers of different pH (citrate–phosphate buffer, pH 3.0∼7.0; 0.1 M sodium–phosphate buffer, pH 6.0∼8.0;0.1 M Tris–HCl buffer, pH 7.0∼9.0; 0.1 M glycine–NaOH buffer, pH 8.6∼10.0).

图片1.jpg
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12楼2012-11-08 23:25:09
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梅闲寒笑

金虫 (正式写手)
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scelab: 金币+7, 谢谢交流 2012-11-07 09:53:44
酶的酸碱性，是说酶在进行酶促反应时，酶活力最强时周围环境的酸碱度，，有的酶是胞外酶，有的是胞内酶，它们的酶反应环境都是不同的，最适反应pH值也是不一样的，
一般常用的方法是将酶纯化出来，然后在不同酸碱度的缓冲液中测定酶的酶活力，以pH值为横坐标，酶活力值为纵坐标作图，在酶活力最高时，所用缓冲液的酸碱度即为酶的最适反应pH值，即可准确知酶的酸碱性。如果只是估计一下，那就简单了，，有关酶的文章有很多，，可以查一查多看看
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lym8947
水墨丹青
2楼2012-11-07 08:57:10
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普通回帖

lym8947

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 梅闲寒笑 at 2012-11-07 08:57:10
酶的酸碱性，是说酶在进行酶促反应时，酶活力最强时周围环境的酸碱度，，有的酶是胞外酶，有的是胞内酶，它们的酶反应环境都是不同的，最适反应pH值也是不一样的，
一般常用的方法是将酶纯化出来，然后在不同酸碱度 ...

如果是估计一下的话，而且酶是胞外酶，是不是可以直接测定一下发酵液的PH就可以大概有个判断了呢？？？
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3楼2012-11-07 17:31:04
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林丽萍
4楼2012-11-07 20:02:34
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
就是测定粗酶液的最适作用pH值就行了，纯化费时间。
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lym8947
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5楼2012-11-08 00:13:27
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梅闲寒笑

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by lym8947 at 2012-11-07 17:31:04
如果是估计一下的话，而且酶是胞外酶，是不是可以直接测定一下发酵液的PH就可以大概有个判断了呢？？？...

不一定哦，，培养基自身还有pH值，而且不一定就适合酶，，中性pH值培养基的话，有可能是酸性酶也有可能是碱性，，所以，，，，
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水墨丹青
6楼2012-11-08 09:52:59
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lym8947

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 梅闲寒笑 at 2012-11-08 09:52:59
不一定哦，，培养基自身还有pH值，而且不一定就适合酶，，中性pH值培养基的话，有可能是酸性酶也有可能是碱性，，所以，，，，...

哦，这样啊，那我明白了。不过我查看了下蛋白酶活测定的方法，中性、碱性和酸性的蛋白酶测酶活时缓冲液都是不一样的呢，如果我都不知道是什么蛋白酶该怎么办啊
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7楼2012-11-08 10:16:02
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lym8947

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-11-08 00:13:27
就是测定粗酶液的最适作用pH值就行了，纯化费时间。

谢谢，但是我想请问一下测定蛋白酶酶活的时候缓冲液应该是用哪种啊，我看了国标的方法，中性蛋白酶，碱性蛋白酶和酸性蛋白酶所用的缓冲液都是不一样的啊
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8楼2012-11-08 10:18:38
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zhengzl_163

木虫 (正式写手)
直接酸碱测试呗  看是否变性
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自己的事情
9楼2012-11-08 10:28:11
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匿名

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼2012-11-08 14:24:44
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