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Road2011

银虫 (小有名气)

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[求助] 基因引物与内参引物

做qRT-PCR时，1.目的基因引物是25base,根据估计是191bp,试用于做qRT-PCR不？2.内参引物选择20base的B-actin与选择25base的GAPDH,影响不？现在已经买了20base的B-actin，不知道能用不？
谢谢

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1楼 2012-11-05 11:06:06

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

494750284

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-08 13:54:55
Road2011: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-11-17 17:03:25

1、内参选择actin与gapdh没啥区别，housekeeper嘛
2、想看引物合格与否，首先要看反应条件是否一致、引物扩增条带是否特异单一且无引物二聚体，其次是看其扩增效率。
3、磨刀不误砍柴工。看楼主以上的回答，发现，楼主对PCR的原理了解的很少。不如先花点时间弄明白PCR，以及在此基础上的real-time PCR