24小时热门版块排行榜    

查看: 5235  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

seebinghe

银虫 (正式写手)

[求助] 超声破碎细胞之后 离心转速问题

蛋白在膜和包涵体中都有,超声破碎之后,用多大转速离心分离比较好?新手,不知该怎么办,求各位大侠指教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by seebinghe at 2012-11-05 12:40:14
分过一次了,用的15000rpm,跑胶显示蛋白在膜上 和包涵体中都有。那次是和一个在表达在膜上的蛋白一起离心的,结果被师姐痛骂一顿,说膜上的6000rpm就可以,转速打了膜就有些下来了。想问下膜和包涵体中都有的话, ...

楼主的膜蛋白是要经过去垢剂抽提吗?
我们做膜蛋白的时候一般破碎细胞之后5000g离心15min,去掉未破碎的细胞和包涵体,再将上清拿去超速离心,4000rpm,1h左右,离心下来的就是膜了
10楼2012-11-06 20:38:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
离心的的话, 一般设定为12000RPM(或者15000g以上)以上才可,这样能保证分子量为10kD的蛋白质离心下来,但不知你的目的蛋白分子量有多大?
2楼2012-11-04 19:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seebinghe

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by AZURESKY1999 at 2012-11-04 19:58:30
离心的的话, 一般设定为12000RPM(或者15000g以上)以上才可,这样能保证分子量为10kD的蛋白质离心下来,但不知你的目的蛋白分子量有多大?

分子量12kd左右   膜蛋白, 原核表达 膜和包涵体中都有~
3楼2012-11-04 20:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-06 17:19:48
seebinghe: 金币+3, ★★★很有帮助, 多谢指教 2012-11-08 15:52:21
这要看你想从变性蛋白还是native形式的蛋白继续往下做了。高速离心的话包涵体在沉淀里面,而活性蛋白在上清里面。既然你的目的蛋白部分形成包涵体,你可以试着改变诱导条件而改变目的蛋白在包涵体中的比例,从而便于进一步分离纯化。
4楼2012-11-05 01:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 4/200 2026-08-23 20:55 by 0p9y1isJp2jM
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 4/200 2026-08-23 20:46 by 0p9y1isJp2jM
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 18:58 by lXgU0RvNTDC9
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见