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njutjhy铜虫 (小有名气)
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[求助]
PCR引物之NcoI的问题
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想做个PCR，在设计引物时遇到点问题。故在此发帖求助列位虫友！ 目的基因：5’-CAG ……-3' 目标载体：PET-28a 我想在目的基因上游加Nco I 酶切序列（C/ CATGG），也需要酶切序列中的ATG作为起始密码子。 但是后面多余了个G，会造成移码突变的。结合各种信息，用这个酶及其中ATG的处理方法 1.如果目的基因是以G开头的，那很好，直接使用。可惜我的不是！ 2.可以在G之后根据引物的GC含量补充两个密码子。不知道这样会不会对酶的结构产生很大的影响？ 3.把后面的目的基因第一个密码子改为G（譬如把CAG的改为GAG），但是这就是突变了，也应该会对酶产生影响的吧！ 4.在CATGG后面随便加上两个密码子之后再加个ATG，再接上目的基因。不知道这样会对目的基因的表达产生什么影响？会不会导致表达量降低很多？ 欢迎各位虫友表达针对以上各种方法阐述自己的意见，或者提出不同的建议！参与就有金币拿！ 金币不多，先悬赏100个吧！ [ Last edited by yqbter on 2012-11-2 at 10:22 ] |
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njutjhy
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12楼2012-11-05 09:25:13
njutjhy
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！难道这次又沉了
？？？2楼2012-11-01 14:15:06
cicelyzh
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3楼2012-11-01 14:35:41
susizheng
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4楼2012-11-01 15:29:54