24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

生化与分子

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1.5
帖子: 12
在线: 6.1小时
虫号: 1881067
注册: 2012-07-06
专业: 生物化学

[求助] 目的基因片段胶回收后酶切，然后再跑胶后发现条带很弱，怎么改进（求助）

我要做目的基因的超表达，构建载体的第一步就遇到了困难，我在克隆了目的基因跑胶后做双酶切，然后再跑胶，发现目的条带很弱，根本没有回收的必要了，怎么改进才能得到较亮的酶切条带？请各位帮忙提点儿建议，不胜感激！

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验交流

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

高保真酶扩出目的基因后，如何高效加尾（最好提供加尾体系）已经有7人回复
（基因克隆）双酶切结果与目的条带大小不一致，求有经验的人帮帮我。已经有4人回复
PBI121 与目的片段连接后转入DH5α，长出的菌落提取质粒都是空载，求原因已经有5人回复
目的基因和表达载体连接不上，求指导！！！已经有15人回复
胶回收时跑不出条带已经有65人回复
目的片段与表达载体怎么都连接不上已经有16人回复
载体构建，测序结果显示目的基因全突变，克隆入T载体，菌液PCR全是假阳性已经有11人回复
克隆转化，转化子就是不含目的基因。已经有12人回复
长片段连接问题已经有14人回复
110bp小片段DNA的酶切后回收纯化问题已经有11人回复
pcr产物胶回收浓度低，能不能和T载体连接已经有16人回复
短基因片段合成的相关问题求助已经有5人回复
克隆目的基因已经有11人回复
（侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略已经有89人回复
【资料】分子生物学常见问题解答已经有30人回复
克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？已经有17人回复
【原创】原创之六：环境样品总DNA的提取与纯化【已搜索无重复】已经有178人回复

1楼2012-10-30 21:31:53

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

应助: 41 (小学生)
金币: 4332.1
红花: 12
帖子: 881
在线: 160.1小时
虫号: 447837
注册: 2007-11-01
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

条带弱不要紧啊，只要看得到就可以了，我们组还有人根本看不到，就着位置切结果还连出来了。不过条带弱的话，建议PCR完了一定要先过一下柱或者胶回收一下，除去引物二聚体，不然酶切的时候，引物二聚体都是最容易反应的。一般酶切后条带如果太亮反倒要担心酶切不完全，搞不好连不上，弱一点很正常。建议先回收了连连看。