应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的基因片段胶回收后酶切，然后再跑胶后发现条带很弱，怎么改进（求助）
51/1返回列表
查看: 5266  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

生化与分子

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的基因片段胶回收后酶切，然后再跑胶后发现条带很弱，怎么改进（求助）

我要做目的基因的超表达，构建载体的第一步就遇到了困难，我在克隆了目的基因跑胶后做双酶切，然后再跑胶，发现目的条带很弱，根本没有回收的必要了，怎么改进才能得到较亮的酶切条带？请各位帮忙提点儿建议，不胜感激！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验交流

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-30 21:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

david0308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-31 15:18:42
两种解决方案：1.一般来说如果PCR产物是单一条带的话，可以直接PCR产物回收，然后做双酶切，这样又简单产率也很高而且可以避免更多的突变产生。如果你的目的基因是在文库中拉的话那么其实第二步也可以直接产物回收的。2.如果担心纯度问题的话，最好还是割胶回收，但是呢，要加大PCR的量，而且在胶回收的过程中可以适当的改进，比如说胶回收在过柱子的过程中可以反复过滤3遍，提高产率，DDH2O少加一点，也可以的。
赞一下 回复此楼
哈哈
5楼2012-10-31 13:19:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
你酶切回收后不是该做连接了吗，为什么还要再回收呢？做连接不用很多DNA呀。如果想得到更多的回收产物，加大初始反应体系和DNA的量。
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-31 07:37:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-31 15:18:04
个人建议，仅供参考！
1.扩增之后直接进行酶切，然后再对酶切产物进行胶回收；
2.胶回收效率本来就很低，无论是国产还是进口的试剂盒，反复胶回收肯定量很少；
3.我之前用过Omega的试剂盒，感觉不错；
4.胶回收最后的一步可以更换为ddH2O，更有益于克隆。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2012-10-31 10:34:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

考研生涯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-31 15:18:15
PCR之后如果没有出现非特异性条带，直接做个PCR纯化就行了，要是非特异性条带比较多的话，建议胶回收，酶切之后验证一下就直接连接，不需要在胶回收了。PCR体系可以大点，比如2或者3*50ul。
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-31 11:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +7 爱看书的可乐 2026-08-26 8/400 2026-08-26 10:50 by cmrandy
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 +17 Ldrop2023 2026-08-26 17/850 2026-08-26 10:49 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +3 yanglien 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:40 by bycb2005
[基金申请] 国合里面能看到了 +6 一怀馨秋 2026-08-26 6/300 2026-08-26 10:19 by guo2070
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 13/650 2026-08-26 09:48 by wittyboy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +24 木水思豆 2026-08-25 27/1350 2026-08-26 08:26 by yanchen918
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭