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简单HE认真

木虫 (小有名气)


[交流] 蛋白纯化实验用柱子的维护问题?

我们蛋白纯化常用的柱子有GST、镍柱,每次用完之后要及时清洗吗?该如何清洗呢?实验时常常没有一个较标准的操作,我想把对柱子的损伤降到最低,请教各位大侠,给点意见,小妹在此谢过啦!
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linxt2005

金虫 (小有名气)


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小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-10-26 08:03:06
简单HE认真: 金币+5 2012-10-29 18:56:00
填料的维护主要是体现在3个方面:
1.层析过程维护:需要注意使用的层析缓冲液的类型,各种试剂,操作压力;
2.使用后的处理:比如层析过程出现沉淀,可以用变性剂进行处理,NaOH等,柱子再生,再生方法需要参考说明书;
3.保存:柱子的保存需要在特定的溶液里,比如20%酒精等。

这些填料的维护方法需要根据母体的成分来确定,比如 sephadex 或者 sepharose 的区别还是挺大的。
至于GST,Ni只是作为配基,需要明确这一点先,然后再来讨论,
我觉得最简单的方法就是遵照说明书。
2楼2012-10-25 12:51:03
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robin_yu

铁虫 (初入文坛)



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根据柱子填料的型号去供应商的网站上下载使用指南,然后遵照指南做就可以了
3楼2012-10-25 16:31:44
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diandong

禁虫 (著名写手)


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本帖内容被屏蔽

4楼2012-10-25 17:05:34
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
说明书是干嘛用的呢???????????
5楼2012-10-25 23:16:03
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zoeye

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果是GE的GST柱子 他是有标准的清理程序的 你可以参考 但是要和重生区别开 反复重生柱子的话会对柱子损伤很大

我们纯化NI+的是用的AKTA NI平时用完过完ddH2O(Miliipore) 电导为0后 直接过20%乙醇保存就可以

当年用的GE的4B 记得没错也是保存在20%乙醇里的
6楼2012-10-26 14:11:15
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sxxuan

金虫 (著名写手)



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我们一般都是再生后放在4℃保存,不过再生液里有叠氮钠
7楼2012-10-26 14:26:32
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shine栗宁

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
GST是什么柱子 跟镍柱有什么不同
8楼2012-10-26 14:57:34
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