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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 想扩增10kb多的基因簇，现在有什么技术可以一次性扩增出来吗
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applexixixi

木虫 (小有名气)

[交流] 想扩增10kb多的基因簇，现在有什么技术可以一次性扩增出来吗

10kb多的基因簇是连续的，想扩增出来，在此问问虫友们现在有什么技术可以解决这个问题呢？
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1楼 2012-10-24 16:40:25
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polepolar

银虫 (初入文坛)
★
applexixixi(金币+1): 谢谢参与
可以试一下Phusion聚合酶,据说可以一次扩增10k多.
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3楼2012-10-24 21:43:12
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)
★
applexixixi(金币+1): 谢谢参与
你这够呛吧……分两三段用高保真酶PCR出来再连接呗
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2楼2012-10-24 19:17:23
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wuyun123

禁虫 (著名写手)
★
applexixixi(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
8楼2012-10-24 21:55:46
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zhwenxing

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
applexixixi(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-27 13:46:00
1、很多长片段扩增酶类具有能力达到10kb，但模板需要相当“平滑”
2、先用软件分析一下看看有没有容易形成二级结构的区域，GC比较集中的“岛”
3、设计引物也非常关键，pcr的条件需要摸索
4、尝试一下吧，你扩增出来，就会有一大片粉丝啦！
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13楼2012-10-24 22:53:19
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