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想扩增10kb多的基因簇,现在有什么技术可以一次性扩增出来吗
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applexixixi
木虫
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虫号: 1675755
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想扩增10kb多的基因簇,现在有什么技术可以一次性扩增出来吗
10kb多的基因簇是连续的,想扩增出来,在此问问虫友们现在有什么技术可以解决这个问题呢?
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1楼
2012-10-24 16:40:25
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applexixixi
木虫
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引用回帖:
13楼
:
Originally posted by
zhwenxing
at 2012-10-24 22:53:19
1、很多长片段扩增酶类具有能力达到10kb,但模板需要相当“平滑”
2、先用软件分析一下看看有没有容易形成二级结构的区域,GC比较集中的“岛”
3、设计引物也非常关键,pcr的条件需要摸索
4、尝试一下吧,你扩增 ...
谢谢这么多好的建议!
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23楼
2012-10-29 17:46:07
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weigh1111
铁杆木虫
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帖子: 580
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★
applexixixi(金币+1): 谢谢参与
你这够呛吧……分两三段用高保真酶PCR出来再连接呗
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2楼
2012-10-24 19:17:23
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polepolar
银虫
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在线: 16.9小时
虫号: 1907839
★
applexixixi(金币+1): 谢谢参与
可以试一下Phusion聚合酶,据说可以一次扩增10k多.
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3楼
2012-10-24 21:43:12
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wuyun123
禁虫
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★
applexixixi(金币+1): 谢谢参与
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8楼
2012-10-24 21:55:46
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