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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » HInd III EcoR I双酶切问题
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微微右旋

金虫 (正式写手)

[求助] HInd III EcoR I双酶切问题

小弟用8f 1510 扩增细菌16SrDNA 进行TA克隆 菌落PCR后用HInd III  EcoR I这两种酶切，但结果有点想不明白！求指教！不胜感激！
PS： 第一条泳道是1200bp的Maker
        第二条泳道为EcoR I 单酶切  
     第三条泳道为HInd III 单酶切
     第四条泳道为EcoR I 和HInd III 双酶切
反应体系按照Takara 标准体系 PCR产物5ul
问题  为什么单酶切有三条带子  而双酶切就两条  求解？
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    • 2012-10-21 22:45:45, 2.66 M

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1楼2012-10-21 22:51:02
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微微右旋

金虫 (正式写手)
2楼2012-10-21 23:32:48
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微微右旋

金虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by lanjb1013 at 2012-10-25 16:26:12
为啥要酶切了？菌落pcr后，测序就可以了，你的目的是啥了？

200多个克隆，其中有很多是一样的，要是直接测序，费用较大，所以酶切后压缩测序量，将不同OTU的克隆拿去测序。
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10楼2012-10-27 23:00:24
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微微右旋

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by piaoying_jys at 2012-10-25 15:32:08
一次结果不足为据，至少还要重复两次，如果还是这样子的，才有统计学意义

重复了 但是结果一样，现在得出的结论是，限制性内切酶选的不合适！
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11楼2012-10-27 23:01:14
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微微右旋

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by theSubtleAir at 2012-10-25 14:29:54
双酶切你怎么切的   两个酶加一起了么  

两个酶一起加不行吗？求解！
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12楼2012-10-27 23:01:45
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微微右旋

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangyinshen at 2012-10-22 09:34:23
分子克隆的结果很难讲，有的时候偶然性很大，会出一些难以解释的奇怪结果，你再重复两遍，如果还是这样子的话再来讨论，否则没有意义

重复了 但结果都一样 现在换了限制性内切酶 不知道结果会怎样！
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13楼2012-10-27 23:02:36
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