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微微右旋

金虫 (正式写手)

[求助] HInd III EcoR I双酶切问题

小弟用8f 1510 扩增细菌16SrDNA 进行TA克隆 菌落PCR后用HInd III  EcoR I这两种酶切,但结果有点想不明白!求指教!不胜感激!
PS: 第一条泳道是1200bp的Maker
        第二条泳道为EcoR I 单酶切  
     第三条泳道为HInd III 单酶切
     第四条泳道为EcoR I 和HInd III 双酶切
反应体系按照Takara 标准体系 PCR产物5ul
问题  为什么单酶切有三条带子  而双酶切就两条  求解?
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  • 2012-10-21 22:45:45, 2.66 M

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lanjb1013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

为啥要酶切?pcr筛选后,测序就可以了。
8楼2012-10-25 16:25:08
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lanjb1013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

为啥要酶切了?菌落pcr后,测序就可以了,你的目的是啥了?
9楼2012-10-25 16:26:12
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lanjb1013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-30 15:51:31
你的是T载体啥,用载体上的通用引物,跑PCR根据插入片段的大小来判断,你的酶切也只能看出插入片段的大小,我觉得用PCR的方法更快捷,我们t载体克隆都是这样的方法。
14楼2012-10-30 09:17:28
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