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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选后没有目的片段
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ltj1988

铁虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选后没有目的片段

最近在做重组子的筛选，用的蓝白斑筛选方法，一共做了五个片段的转载，其中三个片段大小在150-200bp，效果都很好；另两个片段大小一个是1100bp左右，另一个是1800bp左右，这两个的平板上也都有白班，但最终的pcr验证却没有想要的片段。五个片段的操作上相同，为什么大片段的就总也转不进去，很费解，求各位高人给分析一下！
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没有白费的辛苦
1楼 2012-10-18 10:18:17
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ltj1988

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 吴劲松 at 2012-10-18 11:22:29
T载体是连1－2kb的片段是没有什么问题的。可能是载体本身有问题了，或者放得比较久，反复冻融了，连长片段能力会下降比短片段更显著。

还有这个连接能力下降的原因啊，受益了！
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没有白费的辛苦
8楼2012-10-18 18:04:47
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chenximutao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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ltj1988: 金币+1, ★有帮助 2012-10-18 18:03:10
提质粒看下转没转进去，有的话酶切验证下~~~
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浮尘中的坚持弥足珍贵
2楼2012-10-18 10:56:47
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吴劲松

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
T载体是连1－2kb的片段是没有什么问题的。可能是载体本身有问题了，或者放得比较久，反复冻融了，连长片段能力会下降比短片段更显著。
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生命不息，奋斗不止
3楼2012-10-18 11:22:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
由于分子量增加，插入大片段要相应增加插入片段的量，以确保载体：插入片段分子数目约为1:3.
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4楼2012-10-18 12:15:36
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