应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何取发酵液测酶活
51/1返回列表
查看: 3278  |  回复: 12
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

[求助] 如何取发酵液测酶活

最近在做米曲霉液体发酵产淀粉酶，测定酶活方法如下：
a)原碘液
称取碘化钾22.0g溶于约300mL水中，加人碘11.0g，在搅拌下使其溶解，然后移入500ml容量瓶中，用水定容，贮于棕色瓶中备用(每月制备一次)。
b)稀碘液
称取碘化钾20.0g溶于约300mL水中，准确加入原碘液2.00ml，全部移人500mL容量瓶中，用水定容，贮于棕色瓶中备用(须当天配制)。

标准溶液的制备: 取8支试管做好标记,依次加入1g/L可溶性淀粉溶液0mL、0.5 mL、1.0mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、3.5 mL, 再用蒸馏水将各试管补至5 mL。得到浓度为0 mg/mL、0.1 mg/mL、0.2mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL、0.6 mg/mL、0.7 mg/mL 的淀粉标准液。
取8支试管做好标记, 依次加入制作好的淀粉标准液1mL，碘稀释液5mL 混匀, 以1号试管中的溶液作为标准空白样, 在660nm 处测定淀粉标准液的吸光值。
酶活测定：
吸取4mL 可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液1mL，摇匀后于60 ℃恒温水浴中预热5min。立即加入酶液0.2mL, 计时, 摇匀，反应5min。
立即吸取反应液1mL, 加入盛有0.5mL 稀盐酸和5mL 稀碘液的试管中, 摇匀。并以0.5mL稀盐酸和5mL碘稀释液为空白, 在660nm 波长下, 测定吸光值, 制作淀粉含量的标准曲线和回归方程。根据回归方程, 计算反应后溶液中淀粉的浓度。

采用可溶性淀粉做碳源，取发酵液离心（我的米曲霉菌丝体成条状，发酵液澄清，没什么杂质，感觉离不离心区别不大），然后取上清测酶活，问题是淀粉做碳源，发酵液中有淀粉，结果导致实验组吸光值比用水代替发酵液的还要高，颜色还要深（当然我的淀粉酶活肯定也很低），是换一种碳源还是换一种测定方法？用DNS法的话用葡萄糖和麦芽糖做碳源时又怎么办？可是我要做不同碳源的优化实验啊？
       还望高人指点啊？？？？？急急急急啊？？？

360截图20121013215735343.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-13 22:25:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王之御魂: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢指导 2012-10-16 14:05:58
不要紧的，一般可利用的碳源较多的时候，酶活力都较低，到利用得差不多的时候酶活力才高，如果你测定不出酶活力就每天取样测定一次就行，无论什么方法测定都可以的，你会得到底物含量和酶活力变化这两条曲线。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-10-13 23:20:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
用DNS法确实测得到的是总的淀粉酶活力，用碘法才是主要测得到内切酶的活力。

发酵液里残留的淀粉可以将发酵液灭活之后测得。

酶活力测得到是负值确实因为酶活力太低，导致产生误差。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-10-14 14:48:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
应该用灭活之后的发酵液，而不是水。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2012-10-14 21:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
不能这样代替的，你多看看文献。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2012-10-15 02:59:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王之御魂 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +5 炎黄贵胄 2026-08-22 6/300 2026-08-24 06:34 by sincosx
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭