| 查看: 5275 | 回复: 10 | ||
lxyyzz木虫 (小有名气)
|
[求助]
富含脯氨酸的蛋白质为什么在进行SDS-PAGE的时候，分子量会比本来的分子量大很多？ 已有1人参与
|
|
RT，求高人解释，SDS-PAGE不是本来剔除了电荷的影响么。 另外，到底什么样的算脯氨酸“富集”？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有286人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 重组蛋白为什么分子量变为原来的3倍了？
已经有13人回复
- 麻烦请问下如果一个蛋白质的分子量在8-9kDA，那相对分子质量是多少？按8.5计算吗？
已经有3人回复
- 分子量接近，电荷接近的蛋白质怎么分离开来？
已经有16人回复
- 蛋白质类材料的分子量测试
已经有6人回复
- sds-page跑胶，丙烯酰胺浓度对应蛋白质分子量的范围
已经有7人回复
- Tricine SDS-PAGE的样品缓冲液与蛋白质样品
已经有8人回复
- 分子量13KDa的蛋白的转膜条件？
已经有6人回复
- NCBI数据库里给出的蛋白分子量时整个蛋白分子量还是一个亚基分子量呢
已经有9人回复
- 如果分别使用SDS-PAGE和WB方法检测一种10KD蛋白质
已经有3人回复
- WB中如何根据蛋白质的分子量来选择分离胶的浓度？
已经有12人回复
- 【课件】SDS－PAGE电泳分离蛋白质与 蛋白质免疫印迹
已经有75人回复
- 提取的蛋白做SDS-PAEG时上样量可以不同吗？
已经有10人回复
- 蛋白表达分子量偏大
已经有25人回复
- SDS-PAGE在分离的过程中 为什么分子量小的 流动的比较快
已经有4人回复
- 为什么SDS-PAGE胶在做胶的时候会出现不均匀的条纹？
已经有17人回复
- 超低分子量SDS-PAGE
已经有14人回复
- SDS-PAGE蛋白质电泳，电泳迁移率只与分子量相关吗？
已经有11人回复
- SDS-PAGE 显示的蛋白分子量比实际大
已经有5人回复
- SDS-PAGE和PAGE的区别（SDS-PAGE测出来的一定就是蛋白质相对分子质量？）
已经有17人回复
- SDS-PAGE电泳蛋白质变性
已经有7人回复
- SDS-PAGE时分子量差别小于1KD的蛋白质条带，用什么胶才能分开？
已经有8人回复
- 如何跑SDS-PAGE大分子量电泳
已经有3人回复
lxyyzz
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3569.6
- 散金: 14
- 帖子: 247
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 725367
- 注册: 2009-03-18
- 性别: GG
- 专业: 细胞周期与调控
2楼2012-10-10 09:01:33
3楼2012-10-12 22:29:01
lxyyzz
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3569.6
- 散金: 14
- 帖子: 247
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 725367
- 注册: 2009-03-18
- 性别: GG
- 专业: 细胞周期与调控
4楼2012-10-13 09:59:47
5楼2012-10-13 21:44:03
lxyyzz
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3569.6
- 散金: 14
- 帖子: 247
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 725367
- 注册: 2009-03-18
- 性别: GG
- 专业: 细胞周期与调控
6楼2012-10-16 10:00:04
2008430117
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 444.7
- 散金: 28
- 红花: 1
- 帖子: 209
- 在线: 195.4小时
- 虫号: 2086236
- 注册: 2012-10-25
- 性别: MM
- 专业: 细胞周期与调控
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lxyyzz: 金币+5, ★有帮助, 谢谢交流~ 2012-11-09 10:01:46
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流问题 2012-11-09 14:29:43
lxyyzz: 金币+5, ★有帮助, 谢谢交流~ 2012-11-09 10:01:46
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流问题 2012-11-09 14:29:43
|
1.有可能不是富含脯氨酸的原因 2.上面提到是纯化的蛋白，有没有可能这种蛋白含有较多的半胱氨酸，有可能出现3.的情况 3.在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。但它却于目标条带有相同的免疫学活性，在WB反应中可见其能与目标条带对应的抗体作用。 4. 处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。 我也是新手，希望对你有帮助。。。。  |
7楼2012-11-08 19:17:07
lxyyzz
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3569.6
- 散金: 14
- 帖子: 247
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 725367
- 注册: 2009-03-18
- 性别: GG
- 专业: 细胞周期与调控
|
关于你说的这种情况，我觉得可能有些道理，但是我还有些疑问： 1. 以前有跑过富含半胱氨酸的蛋白质，但是分子量没发现差得很多啊。 2. 关于loading的处理，我们是用DTT做还原剂然后100度煮10min后上样，另外loading里面本来就存在EDTA。没有再补加过。我们实验室一直是这样操作的。 3. 我以前做过一个截短型GST标签的蛋白，加上GST标签实际分子量只有35kDa，但是它脯氨酸含量有些高，80个氨基酸有15个脯氨酸，实际电泳的结果在45kDa，多出来10kDa。我查了下，这80个氨基酸中并没有半胱氨酸。 我仍然觉得确实是脯氨酸的问题，只是不太明白为什么。 欢迎讨论交流！ |
8楼2012-11-09 14:05:14
9楼2013-03-13 17:32:59
lxyyzz
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3569.6
- 散金: 14
- 帖子: 247
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 725367
- 注册: 2009-03-18
- 性别: GG
- 专业: 细胞周期与调控
10楼2013-03-13 18:49:39
20