24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1487  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)

[求助] cDNA文库构建lambda dilution buffer的配制

大家好!我最近要建一个cDNA文库,选用的是Clontech的SMART cDNA Library Construction Kit,要求自己配制10×lambda dilution buffer和1×lambda dilution buffer。我要配制1M Tris-HCl (pH 7.5),实验室现在有Tris hydrochloride固体,瓶子上标有pH(0.1M)为3.5-5.0,这要怎么配制啊?此外,还有2% Gelatin,这里的2%是还是质量体积比吗?具体要怎么配制呢?请各位帮个忙,谢谢!

附:已知配方为:
10× Lambda dilution buffer
                                终浓度             配制1L溶液需要量
NaCl                          1.0 M                              58.3 g
MgSO4•7H2O             0.1 M                             24.65 g
Tris-HCl (pH 7.5)  0.35 M                        350.0 ml of 1 M
加H2O到终体积为1L。高压灭菌,4℃保存。
1× Lambda dilution buffer
100 ml    10× Lambda dilution buffer
5 ml        2% Gelatin(0.01%终浓度)
加H2O到终体积为1L。高压灭菌,4℃保存。
回复此楼
努力,奋斗,拼搏。。。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by bohr86 at 2012-10-10 11:56:13
灭菌后,冷却都不能形成凝胶了? 这个gelatin 什么牌子的?...

是的,冷却后一点不凝。我是在生工买的,品牌是BBI,100g 粉末状的。
努力,奋斗,拼搏。。。
10楼2012-10-10 15:14:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

bohr86

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+4, 鼓励应助 2012-10-07 17:24:07
第一个问题:我觉得你还是不要用Tris hydrochloride 来配置Tris 缓冲溶液,里面的HCl比较多,配出来会偏酸性,调碱一般有两种方法:添加Tris base ,但会增加缓冲溶液的浓度;用NaOH调又会带入新的离子,可能会对下面实验有影响。为什么不直接用Tris base 配呢?
第二个问题:2%的Gelatin一般只的是w/v浓度.

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-10-05 23:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bohr86 at 2012-10-05 23:03:26
第一个问题:我觉得你还是不要用Tris hydrochloride 来配置Tris 缓冲溶液,里面的HCl比较多,配出来会偏酸性,调碱一般有两种方法:添加Tris base ,但会增加缓冲溶液的浓度;用NaOH调又会带入新的离子,可能会对下 ...

呵呵,谢谢啊!很有帮助!
努力,奋斗,拼搏。。。
3楼2012-10-06 09:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bohr86 at 2012-10-05 23:03:26
第一个问题:我觉得你还是不要用Tris hydrochloride 来配置Tris 缓冲溶液,里面的HCl比较多,配出来会偏酸性,调碱一般有两种方法:添加Tris base ,但会增加缓冲溶液的浓度;用NaOH调又会带入新的离子,可能会对下 ...

问下,明胶在配制后,要灭菌吗?如果要灭菌,是高压灭菌还是直接0.22um滤头过滤呢?
努力,奋斗,拼搏。。。
4楼2012-10-06 10:02:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 考博 +4 Eternitf 2026-04-29 4/200 2026-05-02 16:10 by yejenny
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:51 by zahslv263y
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:51 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:36 by zahslv263y
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:21 by zahslv263y
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:06 by zahslv263y
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:21 by zahslv263y
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:06 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:06 by zahslv263y
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 3/150 2026-05-02 10:21 by ovidyohpyz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-02 10:21 by ovidyohpyz
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-02 10:06 by ovidyohpyz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 3/150 2026-05-02 09:36 by dz7y1p1i98
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 5/250 2026-05-02 09:21 by dz7y1p1i98
[考博] 药化及相关博士的申请 5+3 中药学渣 2026-04-29 3/150 2026-05-01 18:14 by babero
[有机交流] 一个化合物的合成路线:CAS:367929-02-0 名称:8β-乙烯基雌二醇 50+4 zhquanbing 2026-04-28 4/200 2026-04-30 22:45 by zyqchem
[文学芳草园] 太白金星有点烦 +3 yexuqing 2026-04-27 3/150 2026-04-30 21:56 by myrtle
[考博] 中国地质大学(北京)博士招生补录,数理学院材料科学与工程专业和材料与化工专业 +3 liuxh329 2026-04-29 3/150 2026-04-30 15:42 by 顺利毕业zs
[论文投稿] 有没有快的中文核心比较快录用的,纳米材料光催化 5+3 2914439618 2026-04-27 4/200 2026-04-29 08:59 by 北京莱茵润色
[论文投稿] 有人投过CCC中国控制会议吗? 19+3 初九凡 2026-04-26 3/150 2026-04-27 08:58 by 北京莱茵润色
信息提示
请填处理意见