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boylover123

金虫 (初入文坛)

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[交流] 关于Transwell迁移实验的一些问题

最近在做Transwell迁移实验，但一直不是很成功，下面有几个问题想跟大家探讨一下，还请各位虫友不吝赐教。
1、上层小室加的细胞悬液为什么要含0.5%的BSA，BSA的作用是什么。
2、下层我用的是含5%FBS的培养基，曾经用过0.4%FBS的培养基，细胞没迁移过去，下层小室FBS是不是含量越低越好。
3、还有就是transwell小室实验前需不需要怎么处理一下，比如用无血清培养基浸润半个小时什么的。
4、加完细胞悬液后一般多长时间染色观察，我看文献有说5h，但是我觉得5h根本都迁移不过去。

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1楼2012-09-29 11:04:52

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spiderboy

金虫 (正式写手)

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★ ★ ★ ★
boylover123(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+3, 鼓励发帖交流 2012-09-30 08:05:12

迁移就是要观察癌细胞或具有迁移能力的细胞从营养贫瘠处往丰富处迁移的能力。
1、第一个问题：加BSA的作用就是要模拟小室下层加的FBS的环境，保证实验的严谨性。
2、第二个问题：FBS用平常正常的比例就行，平常应该都是10%的FBS。0.4明显太小了，跟没加一样，细胞当然不容易迁移过去。
3、在细胞悬液加到小室前，需要事先浸润。我之前就是直接浸润在有加FBS的培养基。不过我认为你说的应该更严谨些。
4、不同细胞的迁移能力不同。所以需要事先做个时间梯度，把握下大概的时间。通常我控制在10个小时左右。