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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western blot SDS电泳时溴芬兰线弥散的问题
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nieyaru

新虫 (小有名气)

[求助] 关于western blot SDS电泳时溴芬兰线弥散的问题

我刚做WB，是大鼠肝组织。电泳的时候发现在浓缩胶里面样品压的不是很直，重要的是不像marker压的那样细，而且跑着跑着就会有弥散的现象，样品都跑跑到分离胶了但是marker还没到；电泳条件是浓缩胶50V，分离胶80V；转完我就用考染了一下胶， 发现我的泳道上半节还可以算清楚，下半截就不清晰了  而且连在一起，那位熟手有遇见这种状况给指点下有可能是什么原因呢？是浓缩胶太长了还是电泳时电压太低了？或者是别的原因啊

psb.jpg在浓缩胶里



2.jpg分离胶里
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1楼 2012-09-28 17:22:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-29 14:44:00
nieyaru: 金币+8, ★★★很有帮助 2012-10-16 16:23:13
通常会有一点点弥散，如果上样量大的话样品道也不会像marker的那么细。考染下面有问题的话，可以检查一下你的分离胶Tris缓冲液的pH。还有就是配胶的所有溶液配好后最好过滤。浓缩胶太长不会造成扩散，只能使样品浓缩得更好。
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2楼2012-09-29 09:08:24
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nieyaru: 金币+3, ★有帮助 2012-10-16 16:23:26
可能是跑胶时间天长了
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jiayoubashaonian
3楼2012-09-29 09:27:21
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nieyaru: 金币+5, ★有帮助 2012-10-16 16:23:37
你的胶浓度是多少，蛋白大小又是多少呢？小蛋白高浓度胶，大蛋白低浓度胶。电压嘛 先80 在120 在跑跑看！
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生物化学与分子生物学
4楼2012-09-29 16:05:31
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nieyaru

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2012-09-29 16:05:31
你的胶浓度是多少，蛋白大小又是多少呢？小蛋白高浓度胶，大蛋白低浓度胶。电压嘛 先80 在120 在跑跑看！

不好意思，前些日子没来的及回复，我用的是4%浓缩胶，10%的分离胶，蛋白最大的二百多，最小的36，电压用的是50Ｖ ，80V。
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5楼2012-10-16 16:22:04
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

电压低了点，调高应该就会好了
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6楼2012-10-16 16:38:06
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-17 14:41:53
引用回帖:
5楼: Originally posted by nieyaru at 2012-10-16 16:22:04
不好意思，前些日子没来的及回复，我用的是4%浓缩胶，10%的分离胶，蛋白最大的二百多，最小的36，电压用的是50Ｖ ，80V。...

你的蛋白相差那么大，两百多的可用8%的分离胶跑，小的可用12%的分离胶跑，合在一起可能就跑的不好。电压的话在提高点，其实那么低也是可以跑的，就是时间慢点，如果胶浓度比较大的话低电话就很难跑下来。
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生物化学与分子生物学
7楼2012-10-17 08:09:08
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四法青云

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

按照楼上的说法，你可以试试梯度胶
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8楼2013-09-24 13:41:41
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小猪猪de烦恼

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lidonghong at 2012-10-17 08:09:08
你的蛋白相差那么大，两百多的可用8%的分离胶跑，小的可用12%的分离胶跑，合在一起可能就跑的不好。电压的话在提高点，其实那么低也是可以跑的，就是时间慢点，如果胶浓度比较大的话低电话就很难跑下来。...

想请教下您，我最近跑电泳也出现楼主那样的情况。我的目的蛋白是10kD左右，电泳之后的胶最后一条10kD的marker成一条细线，对应的蛋白条带也看不出来，全部连成一条直线。重复了好多次都是这样，求帮助
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9楼2014-09-01 17:21:50
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