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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Realtime PCR 内参与目的基因问题
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

1949stone: MolEPI+1, 这不就来了 2012-09-29 07:42:40
引用回帖:
9楼: Originally posted by chenguestc at 2012-09-28 07:46:00
请说明为什么不行啊？请赐教。。。。。。...

嗯...................
       任何说可能可以或者不可以的都是没有好好明白定量的意义
       定量再怎么说也是基于PCR的程序，虽然可以拿对数扩增区域的某一点被认为是与初始模板量呈现线性相关的（2的N次方），从而靠这一点来推测初始模板的情况
       PCR程序在每一个循环对于不同底物有任何扩增的差异，都会被后续的循环扩大，差异出现的越早，到达Ct值的时候这种差异就会越大，对于终点测定的RT-PCR就更为致命了。你用不同程序，怎么保证两者处于同样的扩增水平？别告诉我说只要保证扩增效率一样就行了，那两次间机器中平行如何保证？
       我们做RT-PCR都不敢用不同程序和不同批次的内参来校订样品，更不用说qPCR了
       所以说用不同程序来P内参和目标，这样做出来的都是假内参，必须设计统一程序下来P内参和目标的引物来在一块板子上做PCR，就是这样，也可能出现重复率不高的状况，究其原因，是定量为极其敏感的测定工具，请注意这极其两个字。在一切条件都符合规定的情况才能做出完美的结果，否则错误的操作做出来的都是骗自己的假结果。
       祝实验顺利
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Let God do with it as He wills
10楼2012-09-28 12:26:45
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