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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 收不到放线菌代谢物怎么回事啊
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)

[求助] 收不到放线菌代谢物怎么回事啊

我在收集放线菌的代谢多糖，发现发酵完了后经过醇沉除蛋白后，用高效液相检测发现收不到我要的目的糖，这一步是之前毕业的师姐做的，确实有糖，而我没收到。想问下高人是不是我的菌种退化了还是怎么回事，放线菌退化有什么明显现象可以观察到？
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1楼 2012-09-24 15:59:20
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-25 09:46:27
yvonne_mi: 金币+1, ★有帮助 2012-09-26 09:57:32
培养基、培养温度等条件和之前一样吗？之前培养获得代谢产物有重复过吗？有些菌发酵会不太稳定，培养条件有所改变可能就不能生产目的产物。建议先进行小瓶发酵，做几个平行，快收的时候每天取样检测，摸好发酵条件再进行放大发酵。
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2楼2012-09-25 09:15:30
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zzjcust

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-25 16:56:36
如查菌种没错的的话，建议重新进行发酵时效曲线测定，测定产物的最高量的时间，同注意发酵条件的控制。
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3楼2012-09-25 09:52:25
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hippo_li at 2012-09-25 09:15:30
培养基、培养温度等条件和之前一样吗？之前培养获得代谢产物有重复过吗？有些菌发酵会不太稳定，培养条件有所改变可能就不能生产目的产物。建议先进行小瓶发酵，做几个平行，快收的时候每天取样检测，摸好发酵条件再 ...

师姐之前的课题就是这个，重复收集到了目的产物。听我研三的师姐说从3月实习生来做这个课题后收到的产物状态就不对了！我暑假都发酵三次了，都没收到产物！还有我就是250ml的锥形瓶发酵的！条件，培养基也是师姐之前都摸好的。所以我在想是不是菌种退化了？
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4楼2012-09-25 09:59:32
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zzjcust at 2012-09-25 09:52:25
如查菌种没错的的话，建议重新进行发酵时效曲线测定，测定产物的最高量的时间，同注意发酵条件的控制。

我不用发酵罐做的，就是用锥形瓶做的小量发酵！我要用产物做后期的实验！
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5楼2012-09-25 10:05:17
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yvonne_mi: 金币+1 2012-09-27 09:05:46
拿原始的菌株出来重新划线，养孢子，发酵下。另外HPLC的条件也要注意如流动相等及样品处理。多糖会不会挂在柱子上没冲下来？
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6楼2012-09-25 11:20:27
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氢化大雪

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-25 16:56:45
yvonne_mi: 金币+1, ★★★很有帮助, 现在这个结构老师还在测定当中，不过还是谢谢你的意见 2012-09-26 09:57:03
楼上几位讲的都很好，这些问题都很关键的，建议楼主按照所提建议排查一下原因。多糖用HPLC检测比较麻烦，不知道楼主的多糖有没有特征吸收峰，有的话可以用紫外可见分光光度计进行快速定性检测，省时省力
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美酒香茗
7楼2012-09-25 12:17:17
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-09-25 11:20:27
拿原始的菌株出来重新划线，养孢子，发酵下。另外HPLC的条件也要注意如流动相等及样品处理。多糖会不会挂在柱子上没冲下来？

应该不会  我的流动相就是水相！
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8楼2012-09-26 09:56:22
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-26 14:12:00
yvonne_mi: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-27 09:04:59
感觉主要问题还是菌株和培养条件上吧~一般出现楼主这种情况都是这两个原因，菌株的话，如果当年在菌种库保种了的话去买一管最原始的回来吧~然后就是培养条件了，你配培养基用的那些蛋白胨啊什么的最好能够和你师姐的是一个批次的，再不济也要是一家公司的~
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9楼2012-09-26 12:11:34
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yvonne_mi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-09-26 12:11:34
感觉主要问题还是菌株和培养条件上吧~一般出现楼主这种情况都是这两个原因，菌株的话，如果当年在菌种库保种了的话去买一管最原始的回来吧~然后就是培养条件了，你配培养基用的那些蛋白胨啊什么的最好能够和你师姐的 ...

其实我也这么觉得的，所以决定要去找老师要要看原来保存的菌株！谢谢了
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10楼2012-09-27 09:03:59
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